[發明專利]一種快速檢測工業巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法

有效

• 申請號: 201710383811.8
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107142312B
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 尹花;董建軍;賀揚;陳璐;趙玉祥;萬秀娟;陳嶸;侯曉平;李梅;楊梅
• 申請（專利權）人: 青島啤酒股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 劉雁君

1.一種快速檢測工業巴氏酵母芳香醇代謝基因的方法，包括總RNA的提取、逆轉錄反應制備cDNA模板、多重PCR反應、毛細血管電泳、產物片段分析，其特征在于，針對工業巴氏酵母芳香醇代謝相關基因ADH1-Sc，ADH1-Sb，ADH3-Sc，ADH3-Sb，ADH4-Sc，ADH4-Sb，ADH5-Sc，ADH5-Sb，ARO8-Sc，ARO9-Sc，ARO9-Sb，ARO10-Sc，ARO10-Sb，ARO80-Sc和ARO80-Sb，逆轉錄反應制備cDNA模板應用引物為SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30，多重PCR反應中應用引物SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ I DNO.21、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29；

所述多重PCR反應的反應體系中，總反應體系為20μL，其中，25mM MgCl₂ 4.0μL、5×PCR緩沖液4.0μL、DNA聚合酶0.7μL、多重PCR反應中應用引物2μL、多重PCR反應中應用cDNA模板9.3μL；擴增參數為：95℃預變性10分鐘；94℃變性30秒；退火溫度56℃，30秒；71℃延伸1分鐘，循環35次。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括作為內參照基因的工業巴氏酵母β-actin基因ACT1-Sc、ACT1-Sb，逆轉錄反應制備cDNA模板應用引物為SEQ ID NO.32、SEQ IDNO.34；多重PCR反應中應用引物SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述應用引物SEQ ID NO.2的濃度為125nM、SEQ ID NO.4的濃度為62.5nM、SEQ ID NO.6的濃度為500nM、SEQ ID NO.8的濃度為7.8125nM、SEQ ID NO.10的濃度為500nM、SEQ ID NO.12的濃度為7.8125nM、SEQ ID NO.14的濃度為125nM、SEQ ID NO.16的濃度為500nM、SEQ ID NO.18的濃度為500nM、SEQ IDNO.20的濃度為62.5nM、SEQ ID NO.22的濃度為500nM、SEQ ID NO.24的濃度為500nM、SEQID NO.26的濃度為500nM、SEQ ID NO.28的濃度為1.5μM、SEQ ID NO.30的濃度為500nM、SEQID NO.32的濃度為500nM、SEQ ID NO.34的濃度為0.5nM。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述應用引物SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.25、SEQ IDNO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33的濃度均為200nM。