[發明專利]一種毒死蜱抗原及其制備方法

在審

• 申請號: 201710383757.7
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107163081A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 鄒曉蘭;徐波;周麗;袁杰;李林
• 申請（專利權）人: 無錫中德伯爾生物技術有限公司
• 主分類號: C07F9/58
• 分類號: C07F9/58;C07K14/765
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟

技術領域

本發明涉及生物化工技術領域，尤其涉及一種毒死蜱抗原及其制備方法。

背景技術

毒死蜱[chlorpyrifos，O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫逐磷酸酯]，商品名為毒死蜱、樂斯本、白蟻清等，毒死蜱原藥為白色顆粒狀晶體，室溫下穩定，有硫醇氣味，比重1.398(43.5℃)，熔點41.5～43.5℃，在水中的溶解度為1.2×10^-5g/kg，溶于大多數有機溶劑。通過觸殺、胃毒和熏蒸三種作用方式防治糧食、果樹、蔬菜和其他經濟作物的害蟲，經過皮膚、呼吸道以及腸胃吸收等途徑進入人體后，可與膽堿酯酶迅速結合，形成磷?；憠A酯酶，使其失去催化水解乙酰膽堿的能力，導致大量的乙酰膽堿在體內蓄積，并抑制僅有的乙酰膽堿酯酶活力，使中樞神經系統及膽堿能神經過度興奮而出現中毒癥狀，長期作用人體還可引起致畸、致癌、致突變危害。

毒死蜱目前廣泛地應用于農業生產上，作為一種廣譜型有機磷酸酯類殺蟲劑，是甲胺磷和甲基對硫磷等高毒農藥的新型高效、低毒替代品種之一，也是安全農產品農藥殘留監控的重要品種；而且，環境樣品中發現毒死蜱殘留的情況也日趨嚴重，對人們的健康構成了潛在的威脅。農藥殘留對食品安全造成了嚴重威脅，農藥殘留量的快速檢測技術受到人們越來越廣泛的關注。

目前國內檢測農殘的方法多為氣相色譜和液相色譜法，這些方法不僅需要昂貴的儀器，而且樣品預處理繁瑣，不能滿足現場快速測定農殘的需要。因此，研究一種農藥殘留的快速測定方法具有重要的意義。免疫分析技術是近年來發展起來的檢測農殘新方法，具有簡便、快速、靈敏和特異性強等優點。其中，酶聯免疫吸附測定技術Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)，是將免疫技術與現代測試手段相結合而建立的一種超微量的測定方法，具有成本低、速度快、靈敏度高、儀器設備簡單的特點，適合大批量樣品的快速分析。而免疫學檢測方法的基礎是相應的高特異性、高親和力的抗體的制備，而毒死蜱作為小分子化合物，本身不具備免疫原性，因此，其半抗原的結構改造和全抗原合成是建立免疫速測技術的關鍵和難點之一。

發明內容

鑒于現有技術中存在的問題，本發明的目的之一在于提供一種毒死蜱抗原及其制備方法，本發明所提供的毒死蜱抗原的合成方法簡單，純度高、產量高，對于毒死蜱抗體的制備以及毒死蜱農藥殘留檢測具有重要價值。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種毒死蜱半抗原，所述毒死蜱半抗原的化學結構式如式(I)所示：

第二方面，本發明還提供了如第一方面所述的毒死蜱半抗原的制備方法，其包括如下步驟：

將毒死蜱與巰基丙酸按照1:(2～2.5)的摩爾比反應，得到所述毒死蜱半抗原。

本發明中所述毒死蜱半抗原的反應路線如下所示：

本發明中，所述毒死蜱與巰基丙酸的摩爾比為1:(2～2.5)，例如1:2、1:2.05、1:2.1、1:2.15、1:2.2、1:2.25、1:2.3、1:2.35、1:2.4、1:2.45或1:2.5。

優選地，所述毒死蜱與巰基丙酸的反應在有機溶劑中進行。

優選地，所述有機溶劑為含有NaOH的乙醇溶液。

優選地，所述反應的時間為2～4h，例如2h、2.2h、2.5h、3h、3.2h、3.5h或4h。

優選地，所述毒死蜱半抗原的制備方法可以具體包括如下步驟：

(1)向毒死蜱的乙醇溶液中邊攪拌邊加入NaOH，再加入巰基丙酸的乙醇溶液，毒死蜱與巰基丙酸的摩爾比為1:(2～2.5)，回流反應2～4h；

(2)反應完全后，抽濾出固體，濾液旋轉蒸發干，殘余物中加入5％的NaHCO₃溶液，用正己烷萃取，棄去有機相，水相用鹽酸調pH值至3～4，再用二氯甲烷萃取三次，有機相用無水NaSO₄干燥過夜后，旋轉蒸發干，過硅膠柱純化，得到所述毒死蜱半抗原。

第三方面，本發明還提供了一種毒死蜱抗原，所述毒死蜱抗原由第一方面所述的毒死蜱半抗原與載體蛋白偶聯得到。

優選地，所述毒死蜱半抗原與載體蛋白通過酰胺鍵偶聯。

優選地，所述毒死蜱半抗原與載體蛋白偶聯的摩爾比為(25～30):1，例如25:1、25.5:1、26:1、26.5:1、27:1、27.5:1、28:1、28.5:1、29:1、29.5:1或30:1，優選為30:1。