[發(fā)明專利]RGDF靶向的新型釕多吡啶配合物載體的制備和評價

在審

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• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107320731A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設計）人: 崔純瑩;鐘榮榮
• 申請（專利權）人: 首都醫(yī)科大學
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K48/00;C07F15/00;C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)11130
• 代理人: 王為,孟旭

技術領域

本發(fā)明涉及序列肽RGDF修飾的釕多吡啶配合物(4’-甲基-2,2’-聯吡啶-4-酰胺-RGDF)雙(2,2’-聯吡啶)二氯化釕(Ru-CO-RGDF)的制備及 Ru-CO-RGDF/survivin-siRNA基因遞送系統(tǒng)的構建，并且對其進行了體內外抗腫瘤活性和基因沉默效率的評價。本專利主要是通過RGDF修飾，增強釕多吡啶配合物的靶向性，使在靶部位的濃度增加，從而減小副作用，提高了治療指數；

背景技術

目前，癌癥已經成為世界第一位致死疾病，治療癌癥是目前科學研究者們的主要目標之一。隨著醫(yī)藥和納米技術的發(fā)展，基因治療癌癥成為可能。基因治療是將外源目的基因通過載體或其它途徑導入體內并在靶組織和靶細胞中顯示出相應生物學效應從而達到治療疾病的一種方法。

RNAi(RNA interference)即RNA干涉，是近年來發(fā)現的在生物體內普遍存在的一種古老的生物學現象,是由雙鏈RNA(dsRNA)介導的、由特定酶參與的特異性基因沉默現象,它在轉錄水平、轉錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達。但是siRNA存在很多缺點，如本身帶有負電荷導致不能穿過細胞膜進入細胞，這類問題的解決成為實現利用RNAi達到基因治療目的的關鍵。

Survivin基因編碼產生的Survivin蛋白以二聚體的形式存在,是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor ofapoptosis proteins,IAPs)的一種新穎的抗細胞凋亡蛋白因子,也是迄今人們所發(fā)現的最強的凋亡抑制因子。

釕配合物與核酸的相互作用研究已經經歷了近三十年的歷史，其研究成果目前主要用于以下幾個方面：核酸結構探針、核酸分子光開關、pH傳感器、化學核酸酶、基因治療、抗癌藥物。目前釕多吡啶配合物Ru-COOH的制備是通過加熱回流合成的，其粒徑在50-70nm左右，其化學形狀穩(wěn)定，形狀為較規(guī)則的球形，其具備一般納米材料的特性，其表面有羧基基團，為化學修飾提供了豐富的反應位點，因此可實現釕多吡啶配合物Ru-COOH的修飾來增加其靶向性。

RGDF是一種含“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸”氨基酸序列的多肽，可識別腫瘤細胞表面特異表達的整合素，并與其特異性結合從而來介導腫瘤的靶向治療。經過RGDF序列肽修飾的抗腫瘤藥物及其遞送系統(tǒng)，可增加藥物的主動靶向性，從而達到特異性治療的目的。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有靶向性的基因載體，Ru-CO-RGDF。

本發(fā)明所述基因載體Ru-CO-RGDF的制備方法，包括以下步驟：合成4’- 甲基-2,2’-聯吡啶-4-甲酸與H-R(Tos)-G-D(OBzl)-F-OBzl通過DCC/HoBt法縮合后，再經過強酸脫保護，最后與雙(2,2’-聯吡啶)二氯化釕縮合，即得。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種基因遞送系統(tǒng)，由基因載體Ru-CO-RGD F和抗腫瘤基因治療藥物survivin-siRNA制備而成。

本發(fā)明所述的基因遞送系統(tǒng)，基因載體Ru-CO-RGDF和抗腫瘤基因治療藥物survivin-siRNA的重量比為1.66:1。

本發(fā)明所述的基因遞送系統(tǒng)，為納米結構。

本發(fā)明另一個目的在于提供基因遞送系統(tǒng)的制備方法。

本發(fā)明所述的制備方法，包括以下步驟：基因載體Ru-CO-RGDF與魚精蛋白在常溫下混合，靜置待用，取抗腫瘤基因survivin-siRNA與DNA在常溫下混合，室溫待用，將上述兩者溶液混合后，即得Ru-CO-RGDF/survivin-siRNA。

其中，Ru-CO-RGDF由以下方法制備而成：4’-甲基-(2,2’-聯吡啶)-4-羧酸與 H-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl在THF與少量DMF中通過DDC/HOBt反應，然后再脫掉保護基團，最后與順式-雙(2,2'-聯吡啶)二氯化釕在加熱回流，氮氣保護下反應8小時得到Ru-CO-RGDF。

優(yōu)選的，Ru-CO-RGDF由以下方法制備而成:

1)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的合成