[發明專利]一種采用載體吸附進行黑曲霉孢子增殖及其干孢子粉的制備方法

在審

• 申請號: 201710381711.1
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN107058209A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 王德培;黃娟
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12N11/02;C12R1/685
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種采用載體吸附進行黑曲霉孢子增殖的制備方法，其特征在于將一定比例的玉米與麩皮混合，然后高溫淀粉酶液化，過濾，加入粉碎的玉米軸顆粒混合，滅菌，接種黑曲霉孢子，固態發酵罐培養，洗脫孢子懸液后加入復合保護劑，孢子懸液與復合保護劑體積比為2∶3，平衡時間為40 min，最后真空干燥，收集黑曲霉干孢子粉；且按如下的步驟進行；

固態發酵罐37℃培養120h→洗脫孢子→加入保護劑→平衡40分鐘→35℃真空干燥16h→收集干孢子；

（1）黑曲霉孢子增殖培養液的制備：

將玉米和麩皮按重量比為7:3的比例混合，按照固形物總重量與水的體積比為1:5，將玉米麩皮與水混合，按玉米重量每克12個單位將高溫淀粉酶加入到上述混合物中液化，100℃煮沸30分鐘，過濾，濾液定溶到原加水體積，即獲得黑曲霉孢子的培養液；

（2）固態發酵罐載體增殖黑曲霉孢子培養的制備：

將粉碎成體積為1cm³的玉米軸芯與上述黑曲霉培養液按重量體積比1:3.5混合，裝入固態發酵罐，經121℃滅菌20分鐘，冷卻至37℃接入黑曲霉孢子，接種量以黑曲霉培養液體積計算10⁴~10⁵CFU/mL，維持固態發酵罐溫度37℃,培養120小時，洗脫后得到孢子懸液；

（3）黑曲霉孢子粉的復合保護劑：

將各組分保護劑準確稱量完全溶解于一定的蒸餾水中，115℃，20min滅菌，冷卻至室溫，加入到孢子懸液中：所述的復合保護劑為：

海藻糖5 g/100mL~ 10 g/100mL

蛋白胨5 g/100mL ~10 g/100mL

甘油2g/100mL~ 4g/100mL；

（4）黑曲霉孢子粉的干燥：黑曲霉孢子粉干燥工藝為35℃、0.4×10⁵Pa真空度干燥16h，收集得到黑曲霉干孢子粉。

2.權利要求1所述的制備方法，其中玉米軸顆粒與黑曲霉孢子培養液按重量體積比為1:3.5時最適于黑曲霉孢子增殖。

3.權利要求1所述的制備方法，其中所述的黑曲霉孢子是經培養、洗滌所得的濃度為5×10⁹CFU/mL ~6×10⁹CFU/mL的孢子懸液。

4.采用權利要求1所制備的黑曲霉干孢子粉在提高黑曲霉孢子粉存活率方面的應用；其存活率高達95.81%，而未使用保護劑的情況下，孢子存活率僅15.23%。

5.采用權利要求1所制備的黑曲霉干孢子粉在延長菌種貯存期方面的應用；所制備的黑曲霉干孢子粉在4℃下貯存一年后的活孢率仍達90.2%。

6.權利要求1所述制備方法中的復合保護劑；其復合保護劑特征組成為：海藻糖5 g/100mL~ 10 g/100mL、蛋白胨5 g/100mL ~10 g/100mL及甘油2g/100mL~ 4g/100mL。

7.權利要求1所述玉米芯作為載體吸附進行孢子增殖的方法，其特征在于玉米芯為經粉碎成體積為1cm³的玉米軸，加入固態發酵罐，加入接種量為10⁴~10⁵CFU/mL黑曲霉孢子的黑曲霉培養液，重量體積比為1:3.5，以黑曲霉培養液體積計算。

8.權利要求1所述一種黑曲霉孢子粉的干燥方法，其特征在于：35℃、0.4×10⁵Pa真空度下干燥16h。

9.采用權利要求1所述的方法制備的黑曲霉干孢子粉在增加孢子增殖空間表面積及溶氧，提高孢子增殖方面的應用。