[發明專利]一種抗細菌感染魚類模型及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201710378269.7
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN108929879B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 張譯月;張文清;林青;狄乾乾
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/85;A01K67/027;A61K45/00;A61P31/04
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區后加入編碼標簽蛋白Myc的序列，構建成pTol2-hsp-Myc-npsn 載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉座酶RNA的混合物注射至單細胞期受精魚卵內，養至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進行熱激處理，并且以anti -Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留，即得到F1代具有抗菌能力的魚類。

2.根據權利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述F1代具有抗菌能力的魚類繼續進行繁殖獲得經熱激處理后穩定具有抗菌能力的魚類。

3.根據權利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述熱激處理為36-42℃處理0.5-2小時，每8-16小時熱激處理一次，共熱激兩次；熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

4.根據權利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述熱激處理為39 ℃處理1小時，每12小時熱激一次，熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

5.一種抗細菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區后加入編碼標簽蛋白Myc的序列，構建成pTol2-hsp-Myc-npsn載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉座酶RNA的混合物注射至單細胞期受精魚卵內，養至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進行熱激處理，并且以anti - Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留并養殖至成魚，即得到抗細菌感染的魚類模型。

6.根據權利要求5所述的一種抗細菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述F1代具有抗菌能力的魚類繼續進行繁殖獲得經熱激處理后穩定抗細菌感染的魚類模型。

7.根據權利要求5所述的一種抗細菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述熱激處理為36-42℃處理0.5-2小時，每8-16小時熱激處理一次，共熱激兩次；熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

8.根據權利要求5所述的一種抗細菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述熱激處理為39 ℃處理1小時，每12小時熱激一次，共熱激兩次，熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

9.一種npsn過表達魚類的制備方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區后加入編碼標簽蛋白Myc的序列，構建成pTol2-hsp-Myc-npsn載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉座酶RNA的混合物注射至單細胞期受精魚卵內，養至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進行熱激處理，并且以anti - Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留并養殖至成魚，即得到npsn過表達魚類。