[發(fā)明專利]一種抗細(xì)菌感染魚類模型及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710378269.7
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN108929879B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張譯月;張文清;林青;狄乾乾
• 申請（專利權(quán)）人: 南方醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/85;A01K67/027;A61K45/00;A61P31/04
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區(qū)（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區(qū)后加入編碼標(biāo)簽蛋白Myc的序列，構(gòu)建成pTol2-hsp-Myc-npsn 載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉(zhuǎn)座酶RNA的混合物注射至單細(xì)胞期受精魚卵內(nèi)，養(yǎng)至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進(jìn)行熱激處理，并且以anti -Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留，即得到F1代具有抗菌能力的魚類。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述F1代具有抗菌能力的魚類繼續(xù)進(jìn)行繁殖獲得經(jīng)熱激處理后穩(wěn)定具有抗菌能力的魚類。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述熱激處理為36-42℃處理0.5-2小時，每8-16小時熱激處理一次，共熱激兩次；熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高魚類抗菌能力的方法，其特征在于，所述熱激處理為39 ℃處理1小時，每12小時熱激一次，熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

5.一種抗細(xì)菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區(qū)（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區(qū)后加入編碼標(biāo)簽蛋白Myc的序列，構(gòu)建成pTol2-hsp-Myc-npsn載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉(zhuǎn)座酶RNA的混合物注射至單細(xì)胞期受精魚卵內(nèi)，養(yǎng)至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進(jìn)行熱激處理，并且以anti - Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留并養(yǎng)殖至成魚，即得到抗細(xì)菌感染的魚類模型。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗細(xì)菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述F1代具有抗菌能力的魚類繼續(xù)進(jìn)行繁殖獲得經(jīng)熱激處理后穩(wěn)定抗細(xì)菌感染的魚類模型。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗細(xì)菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述熱激處理為36-42℃處理0.5-2小時，每8-16小時熱激處理一次，共熱激兩次；熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種抗細(xì)菌感染的魚類模型的制備方法，其特征在于，所述熱激處理為39 ℃處理1小時，每12小時熱激一次，共熱激兩次，熱激處理頻率為每周熱激處理兩次。

9.一種npsn過表達(dá)魚類的制備方法，其特征在于，所述魚類為斑馬魚，包括如下步驟：

1）克隆npsn基因編碼區(qū)（CDS），并且將其插入到pTol2載體的熱休克啟動子后，在npsn編碼區(qū)后加入編碼標(biāo)簽蛋白Myc的序列，構(gòu)建成pTol2-hsp-Myc-npsn載體；

2）將載體通過顯微注射將pTol2-hsp-Myc-npsn載體和轉(zhuǎn)座酶RNA的混合物注射至單細(xì)胞期受精魚卵內(nèi)，養(yǎng)至成魚，即為F 0代；將F 0代與野生型魚類交配獲得F1代，將獲得的受精卵或胚胎進(jìn)行熱激處理，并且以anti - Myc抗體染色篩選Myc陽性胚胎保留并養(yǎng)殖至成魚，即得到npsn過表達(dá)魚類。