[發(fā)明專利]二硫鍵重建法制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710378107.3
• 申請(qǐng)日: 2017-05-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107118358B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇小舟;栗蕾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中原工學(xué)院
• 主分類號(hào): C08J3/075
• 分類號(hào): C08J3/075;C08J3/24;C08L89/00
• 代理公司: 鄭州優(yōu)盾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41125
• 代理人: 孫詩(shī)雨;李宣宣

本發(fā)明公開(kāi)了一種二硫鍵重建法制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法。要解決的技術(shù)問(wèn)題是人工合成高分子膠束的兩親嵌段共聚物在生物體代謝速率慢，會(huì)蓄積，部分對(duì)生物體還有一定的毒性。本發(fā)明包括以下步驟：制備角蛋白溶液；制備天然高分子蛋白溶液；二硫鍵重建法制備復(fù)合膠束：a、將步驟①制備的角蛋白溶液和步驟②制備的天然高分子蛋白溶液混合制得蛋白混合溶液；b、二硫鍵的定量重建：將兩種蛋白的混合溶液置于15?25℃的恒溫中靜置3?12小時(shí)；測(cè)定混合溶液中巰基含量的具體數(shù)值；c、計(jì)算應(yīng)加入氧化劑的量；氧化劑加入后得到復(fù)合蛋白膠束。采用上述技術(shù)方案后的本發(fā)明具有安全無(wú)毒、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、生物相容好、產(chǎn)物可代謝、價(jià)格低廉等突出優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法，具體涉及一種采用二硫鍵重建法制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法。

背景技術(shù)

兩親性嵌段共聚物是既含有親水基團(tuán)又含有疏水基團(tuán)的一類聚合物，其在選擇性溶劑中通過(guò)自組裝可以自發(fā)形成由疏水性內(nèi)核及親水性外殼所組成的高分子膠束。兩親嵌段共聚物憑借其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及潛在的應(yīng)用性能日益成為高分子科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，所制備的膠束在醫(yī)藥、生物、化工、材料等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。

兩親嵌段共聚物體系包括合成的高分子和天然的高分子體系。目前實(shí)際應(yīng)用中所使用的兩親共聚物嵌段多為人工合成材料，乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚芐基谷氨酸、聚ε–己內(nèi)酯等作為疏水片段，另外，聚氧乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等可做為親水片段。其主要可通過(guò)光交聯(lián)、戊二醛，雙重氮聯(lián)苯胺、甲苯二異氰酸酯， 酶交聯(lián)方式對(duì)所形成的膠束進(jìn)行固定制備。人工合成的兩親嵌段共聚物在生物體代謝速率慢，會(huì)蓄積，部分對(duì)生物體還有一定的毒性，其中部分固定方式也會(huì)有一定的毒性。因此需要進(jìn)行深入研究及交叉學(xué)科引入新材料進(jìn)行改良。

天然高分子體系包括各種可作為應(yīng)用膠束的蛋白，主要包括絲素蛋白、絲膠蛋白、各種角蛋白、膠原蛋白、明膠、酪蛋白、白蛋白、清蛋白等等。這些蛋白質(zhì)本身就是兩親嵌段共聚物，每一種蛋白質(zhì)因?yàn)樗H水及疏水性氨基酸的種類及比例的不同而呈現(xiàn)出一定的嵌段特性。但目前天然高分子體系所涉及到的各種蛋白作為應(yīng)用型膠束，基本上都是某種蛋白單一作為應(yīng)用膠束，其缺點(diǎn)是形貌不可控，粒徑及分布不均一，功能有限。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是人工合成高分子膠束的兩親嵌段共聚物在生物體代謝速率慢，會(huì)蓄積，部分對(duì)生物體還有一定的毒性，其中部分固定方式也會(huì)有一定的毒性；某種天然高分子蛋白單一作為應(yīng)用膠束，形貌不可控，粒徑及分布不均一，功能有限，提供一種安全無(wú)毒、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、生物相容好、產(chǎn)物可代謝、價(jià)格低廉的二硫鍵重建法制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：一種二硫鍵重建法制備天然蛋白復(fù)合膠束的方法，包括以下步驟：①制備質(zhì)量濃度為0.5-5%角蛋白溶液；②制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2-5%的天然高分子蛋白溶液；③二硫鍵重建法制備復(fù)合膠束：a、蛋白混合溶液的制備，將步驟①制備的角蛋白溶液和步驟②制備的天然高分子蛋白溶液混合制得蛋白混合溶液，使角蛋白達(dá)到混合后總蛋白質(zhì)量的10%以上，同時(shí)將溶液的pH值調(diào)節(jié)至兩種蛋白的等電點(diǎn)之間；b、二硫鍵的定量重建：將兩種蛋白的混合溶液置于15-25℃的恒溫中靜置3-12小時(shí)；使用巰基試劑DTNB通過(guò)分光光度法測(cè)定兩種蛋白的混合溶液中巰基含量的具體數(shù)值；c、通過(guò)得到的巰基含量的具體數(shù)值計(jì)算應(yīng)加入的氧化劑的量；氧化劑加入后得到經(jīng)過(guò)二硫鍵重建固定好的復(fù)合蛋白膠束。

所述的角蛋白為動(dòng)物毛發(fā)或動(dòng)物蹄角水解制備的角蛋白，所述的天然高分子蛋白為絲素蛋白、絲膠蛋白、膠原蛋白、酪蛋白、白蛋白、清蛋白、大豆蛋白中的任意一種。