[發明專利]二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法

有效

• 申請號: 201710378107.3
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107118358B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 蘇小舟;栗蕾
• 申請（專利權）人: 中原工學院
• 主分類號: C08J3/075
• 分類號: C08J3/075;C08J3/24;C08L89/00
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 孫詩雨;李宣宣

1.一種二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法，其特征在于，包括以下步驟：

①制備質量濃度為0.5-5%角蛋白溶液；

②制備質量分數為0.2-5%的天然高分子蛋白溶液；

③二硫鍵重建法制備復合膠束：

a、蛋白混合溶液的制備，將步驟①制備的角蛋白溶液和步驟②制備的天然高分子蛋白溶液混合制得蛋白混合溶液，使角蛋白達到混合后總蛋白質量的10%以上，同時將溶液的pH值調節至兩種蛋白的等電點之間；

b、二硫鍵的定量重建：將兩種蛋白的混合溶液置于15-25℃的恒溫中靜置3-12小時；使用巰基試劑DTNB通過分光光度法測定兩種蛋白的混合溶液中巰基含量的具體數值；

c、通過得到的巰基含量的具體數值計算應加入的氧化劑的量；氧化劑加入后得到經過二硫鍵重建固定好的復合蛋白膠束；

步驟①所述的制備質量濃度為0.5-5%角蛋白溶液的方法為：將角蛋白固體粉末加入水中，逐漸加入固體NaOH，加入量為蛋白質量的5%，并磁力攪拌直至角蛋白完全溶解；

所述步驟①制備質量濃度為0.5-5%角蛋白溶液時加入溶液總質量0.1%的十二烷基苯磺酸鈉用于防止角蛋白自身因二硫鍵引起的交聯；

步驟②所述的制備任意一種質量分數為0.2-5%的天然高分子蛋白溶液的方法為：采取堿溶解法進行溶解，制備天然高分子蛋白溶液。

2.根據權利要求1所述的二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法，其特征在于：所述的角蛋白為動物毛發或動物蹄角水解制備的角蛋白，所述的天然高分子蛋白為絲素蛋白、絲膠蛋白、膠原蛋白、酪蛋白、白蛋白、清蛋白、大豆蛋白中的任意一種。

3.根據權利要求1所述的二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法，其特征在于：步驟①所述的角蛋白通過Na₂S還原、酸沉淀法制備的，方法為：a、將動物毛發或動物蹄角粉末與Na₂S按照質量比4:3加入密閉玻璃容器中，加入動物毛發或蹄角粉末質量20倍的水，避光放置7-10天得到角蛋白溶液；b、在角蛋白溶液中于20秒內加入濃鹽酸，使角蛋白溶液的pH值在30-60秒內達到2.0-2.5，使角蛋白迅速沉淀；c、待角蛋白沉淀后收集下層的角蛋白沉淀，并用無氧水洗滌2-4次， 5-20℃真空干燥得到白色角蛋白固體粉末。

4.根據權利要求3所述的二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法，其特征在于：所述的角蛋白沉淀后收集下層的角蛋白沉淀時：先將角蛋白溶液上層所漂浮的色素蛋白取出，棄去上層液體，離心收集下層的角蛋白沉淀，離心轉速為3000轉/min。

5.根據權利要求1所述的二硫鍵重建法制備天然蛋白復合膠束的方法，其特征在于：步驟③中加入的氧化劑為H₂0₂或NaB0₃?4H₂0，加入氧化劑的量為通過分光光度法測定的兩種蛋白的混合溶液中所含巰基等摩爾的量，得到二硫鍵重建后的復合膠束溶液，加入后穩定30min；最后將二硫鍵重建后的復合膠束溶液置在去離子水中進行透析以除去多余的氧化劑，最后得到經過二硫鍵重建固定好的復合蛋白膠束。