[發(fā)明專利]快速檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710376547.5
• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN107058570A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋玉軍;李航;李靜;蘇軍;吳遠航
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽安龍基因醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)33240
• 代理人: 王桂名

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域領(lǐng)域，具體來說是一種快速檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

新生兒中高膽紅素血癥是最常見的臨床情況，8％-11％的新生兒會出現(xiàn)較為嚴(yán)重的膽紅素血癥,但是總血清膽紅素(TSB)上升到一個很高的水平時，則會導(dǎo)致長期疾病的產(chǎn)生，包括血紅素腦病、核黃疸,因此，意識到新生兒高膽紅素血癥的嚴(yán)重性是非常重要的,造成高膽紅素血癥的因素有很多，包括ABO、Rh不相容、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)和丙酮酸脫氫酶的缺乏、遺傳性球形紅細胞增多癥、血紅蛋白合成缺陷、甲狀腺功能衰退、母乳性黃疸、顱內(nèi)血腫等。

UDP糖基轉(zhuǎn)移酶家族1、多肽A1(UGT1A1)、溶質(zhì)載體有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白家族酶中的有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽2(OATP2)作用于膽紅素的攝取和代謝過程，對膽紅素水平的調(diào)節(jié)起到重要作用。OATP2位于人類肝細胞膜底部外側(cè)，是由溶質(zhì)載體有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白家族成員1B1基因所(SLCO1B1)編碼。近期有研究顯示SLCO1B1突變體388G>A,521T>C和463C>A可能通過限制肝膽紅素的攝取來影響。所以快速高效準(zhǔn)確度高的檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測方法對高膽紅素血癥的診斷和治療都起到重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的檢測精度不高、特異性差缺陷，提供一種快速檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測方法來解決上述問題。

本發(fā)明公開了一種快速檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒，包括：Taq DNA聚合酶、10×PCR反應(yīng)緩沖液、MgCl₂、dNTPs、內(nèi)源上游引物FI、內(nèi)源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO。

作為優(yōu)選，所述內(nèi)源上游引物FI、內(nèi)源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO分別是：

FI：5’-TCTTATCTACATAGGTTGTTTAAAGGATTC-3’

RI:5’-ACCATATATCCACATGTATGACCGAC-3’

FO:5’-TGTATTTATTAGCAGCATAAGAATGGAC-3’

RO:5’-CAAAGGGAAAGTGATCATACAATTTAAT-3’

作為優(yōu)選，所述Taq DNA聚合酶的濃度為0.1U/ul，Mg²⁺濃度為4mM，dNTP混合物濃度為0.4mM，引物濃度為10μM。

作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述快速檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒的檢測方法，具體步驟如下：

(1)、提取血液DNA，并稀釋至100ng/ul；

(2)、取20ul ARMS-PCR反應(yīng)體系；

(3)、將混合后的反應(yīng)液放入PCR儀中，設(shè)置程序如下：

95℃預(yù)變性10min，接著進入1個循環(huán)，95℃變性15s，45℃退火45s，72℃延伸45s，共32個循環(huán)，之后，繼續(xù)72℃延伸8min，1個循環(huán)，然后將PCR反應(yīng)產(chǎn)物進行凝膠電泳分析。

作為優(yōu)選，所述的步驟(2)中，所述的ARMS-PCR反應(yīng)體系，具體包括：10×PCR Buffer 2μl，F(xiàn)I 1μl，RI 1μl，F(xiàn)O 1-10μl，RO 1-10μl dNTP混合物1.6μl，Taq DNA聚合酶0.4μl，Mg2+1.6μl,DNA模板1μl，加ddH2O至20μl。

作為優(yōu)選，所述的PCR反應(yīng)體系中內(nèi)源引物和外源引物的比為1:1-10。

作為優(yōu)選，凝膠電泳分析中使用濃度為3％瓊脂糖凝膠。

本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點：

本發(fā)明提供一種快速、高效、設(shè)備要求簡單、低成本、操作容易的檢測SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測方法，具體包括：Taq DNA聚合酶、10×PCR反應(yīng)緩沖液、MgCl₂、dNTPs、內(nèi)源上游引物FI、內(nèi)源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO。本發(fā)明中涉及ARMS PCR技術(shù)是一種特有的在同一個PCR反應(yīng)中使用兩對引物的PCR技術(shù)，從凝膠電泳的結(jié)果中就可以清晰分析出陽性突變和野生型擴增產(chǎn)物，同時也能保證擴增產(chǎn)物的高特異性和高準(zhǔn)確性。本發(fā)明中試劑盒適用幾乎所有的PCR儀，對設(shè)備的要求低，操作的可行性大大提高，相對于需要精密設(shè)備的檢測方法，成本也大大降低。本發(fā)明試劑盒及檢測方法可應(yīng)用于SLCO1B1基因突變的初步檢測，為SLCO1B1基因突變相關(guān)疾病，如：高膽紅素血癥，提供診斷依據(jù)，提高診斷效率。

附圖說明