[發(fā)明專利]快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710376547.5
• 申請(qǐng)日: 2017-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN107058570A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋玉軍;李航;李靜;蘇軍;吳遠(yuǎn)航
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽安龍基因醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)33240
• 代理人: 王桂名

1.一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒，其特征在于：包括：Taq DNA聚合酶、10×PCR反應(yīng)緩沖液、MgCl₂、dNTPs、內(nèi)源上游引物FI、內(nèi)源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒，其特征在于：所述內(nèi)源上游引物FI、內(nèi)源下游引物RI、外源上游引物FO、外源下游引物RO分別是：

FI：5’-TCTTATCTACATAGGTTGTTTAAAGGATTC-3’

RI:5’-ACCATATATCCACATGTATGACCGAC-3’

FO:5’-TGTATTTATTAGCAGCATAAGAATGGAC-3’

RO:5’-CAAAGGGAAAGTGATCATACAATTTAAT-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒，其特征在于：所述Taq DNA聚合酶的濃度為0.1U/ul，Mg²⁺濃度為4mM，dNTP混合物濃度為0.4mM，引物濃度為10μM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)、提取血液DNA，并稀釋至100ng/ul；

(2)、取20ul ARMS-PCR反應(yīng)體系；

(3)、將混合后的反應(yīng)液放入PCR儀中，設(shè)置程序如下：

95℃預(yù)變性10min，接著進(jìn)入1個(gè)循環(huán)，95℃變性15s，45℃退火45s，72℃延伸45s，共32個(gè)循環(huán)，之后，繼續(xù)72℃延伸8min，1個(gè)循環(huán)，然后將PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分析。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：所述的步驟(2)中，所述的ARMS-PCR反應(yīng)體系，具體包括：10×PCR Buffer 2μl，F(xiàn)I 1μl，RI 1μl，F(xiàn)O 1-10μl，RO 1-10μl dNTP混合物1.6μl，Taq DNA聚合酶0.4μl，Mg2+1.6μl,DNA模板1μl，加ddH2O至20μl。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：所述的PCR反應(yīng)體系中內(nèi)源引物和外源引物的比為1:1-10。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種快速檢測(cè)SLCO1B1基因突變的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：凝膠電泳分析中使用濃度為3％瓊脂糖凝膠。