[發明專利]一種不含卵黃的人精子冷凍保護液及保存方法

有效

• 申請號: 201710375384.9
• 申請日: 2017-05-24
• 公開（公告）號: CN107027741B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 岳煥勛;蔣敏;李福平;林麗
• 申請（專利權）人: 四川大學華西第二醫院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊;何凡

本發明公開了一種不含卵黃的人精子冷凍保護液及保存方法，其中，精子冷凍保護液包括以下組分且在保存人精子時各組分的終濃度為：氯化鈉90～110mmol/L、氯化鉀5～6mmol/L、硫酸鎂0.2～0.5mmol/L、氯化鈣2～4mmol/L、磷酸二氫鈉0.2～0.5mmol/L、碳酸氫鈉28～35mmol/L、甘氨酸110～150mmol/L、4?羥乙基哌嗪乙磺酸18～25mmol/L、葡萄糖5～8mmol/L、蔗糖30～60mmol/L、乳酸鈉12～15mmol/L、甘油50～100mL/L，余量為超純水。該精子冷凍保護液不含卵黃，不會引起過敏反應，能對精子冷凍過程中的冷凍損傷具有良好的保護作用，并且對精子生理功能無明顯的負面影響，冷凍后具有良好的前向運動精子復蘇率。

技術領域

本發明屬于人精子保存技術領域，具體涉及一種不含卵黃的人精子冷凍保護液及保存方法。

背景技術

精液冷凍技術是人類精子庫保存精子，得以保持其生命力和受精能力的一項技術。冷凍技術中向精液樣本中添加的冷凍保護劑是使精子在降溫和低溫儲存過程中免受冷凍損傷的關鍵性物質。目前使用的冷凍保護劑中卵黃是主要的成分之一。但是，卵黃來源于雞蛋，具備有生物源性。卵黃由卵黃顆粒、磷脂和蛋白等生物活性物質組成，難以通過過濾、高溫或其它方法達到完全的除菌或滅菌。其中的蛋白質對于人體而言是一種異種蛋白，可能在使用中進入人體引起過敏性反應。再者溶液中混有卵黃顆粒增加了顯微鏡觀察精子時背景存在雜質干擾，且不易去除。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供了一種不含卵黃的人精子冷凍保護液及保存方法，可有效解決現有的冷凍保護劑會引起不良反應，無法達到完全滅菌以及增加觀察的干擾等問題。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種不含卵黃的人精子冷凍保護液，包括以下組分且在保存人精子時各組分的終濃度為：氯化鈉90～110mmol/L、氯化鉀5～6mmol/L、硫酸鎂0.2～0.5mmol/L、氯化鈣2～4mmol/L、磷酸二氫鈉0.2～0.5mmol/L、碳酸氫鈉28～35mmol/L、甘氨酸110～150mmol/L、4-羥乙基哌嗪乙磺酸18～25mmol/L、葡萄糖5～8mmol/L、蔗糖30～60mmol/L、乳酸鈉12～15mmol/L、甘油50～100mL/L，余量為超純水。

進一步地，一種不含卵黃的人精子冷凍保護液，包括以下組分且在保存人精子時各組分的終濃度為：氯化鈉100mmol/L、氯化鉀5.365mmol/L、硫酸鎂0.49mmol/L、氯化鈣2.72mmol/L、磷酸二氫鈉0.31mmol/L、碳酸氫鈉30.95mmol/L、甘氨酸133.2mmol/L、4-羥乙基哌嗪乙磺酸20mmol/L、葡萄糖5.51mmol/L、蔗糖50mmol/L、乳酸鈉12.86mmol/L、甘油70mL/L，余量為超純水。

人精子冷凍保存方法，包括以下步驟：

(1)將上述精子冷凍保護液和精液按體積比為1:1～3混勻；

(2)將步驟(1)所得混合物在室溫下平衡10～15min，然后按照分段降溫方式靜置15～20min；

(3)將步驟(2)所得物轉移到-196℃液氮中保存。

進一步地，步驟(1)中精子冷凍保護液和精液按體積比為1:3。

進一步地，步驟(2)中，在室溫下平衡10min。

進一步地，步驟(2)中分段降溫方式為在-20℃靜置5min，接著在-125～-130℃靜置10min，使之盡快通過液體的冰晶形成期，進而不會對精子造成傷害。

本發明提供的一種不含卵黃的人精子冷凍保護液及保存方法，具有以下有益效果：