[發明專利]一種基于煙粉虱化學感受蛋白的植物驅避劑篩選方法在審
| 申請號： | 201710371817.3 | 申請日： | 2017-05-24 |
| 公開（公告）號： | CN106990083A | 公開（公告）日： | 2017-07-28 |
| 發明（設計）人： | 羅晨;李紅亮;穆常青;吳帆 | 申請（專利權）人： | 北京市農林科學院 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N33/68;C12N15/70;C07K14/435 |
| 代理公司： | 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙)11333 | 代理人： | 胡敬紅 |
| 地址： | 100097 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 煙粉虱 化學 感受 蛋白 植物 驅避劑 篩選 方法 | ||
1.一種基于煙粉虱化學感受蛋白的植物驅避劑篩選方法，其特征在于包括以下工藝步驟：
1)提供煙粉虱化學感受蛋白BtabCSP1；
2)通過競爭性熒光結合方法獲得煙粉虱化學感受蛋白BtabCSP1與氣味的結合反應譜，并計算結合常數KA或解離常數KD，
3)如果煙粉虱氣味物質將1-NPN與BtabCSP1相對熒光值競爭至50％以下，并且結合常數KA高于1.2×104L/μmol以上或解離常數KD低于60μmol/L以下時，確定為適合煙粉虱的氣味驅避劑。
2.根據權利要求1所述的方法，所述的步驟2)中競爭性熒光結合方法獲得煙粉虱重組化學感受蛋白與氣味的結合反應譜的方法步驟包括：
(1)熒光配基1-NPN與煙粉虱化學感受蛋白的結合，測定熒光值，
(2)選取煙粉虱氣味物質和1-NPN進行競爭結合煙粉虱重組化學感受蛋白，測定1-NPN與BtabCSP1相對熒光值，計算結合常數KA。
3.根據權利要求2所述的方法，所述步驟(1)的方法為：在281nm激發波長下，向1μmol/L的煙粉虱化學感受蛋白中逐次加入1mmol/L的1-NPN，充分混勻。
4.根據權利要求1所述的方法，所述步驟2)后還有氣味驅避劑的驗證步驟，所述驗證采用Y型嗅覺儀測試。
5.根據權利要求1所述的方法，所述步驟1)中煙粉虱化學感受蛋白BtabCSP1的獲取方法為：
A)提取煙粉虱成蟲含觸角在內的頭部總RNA；
B)設計煙粉虱化學感受蛋白基因引物，通過RT-PCR獲得煙粉虱化學感受蛋白基因全長；
C)構建煙粉虱化學感受蛋白基因的原核表達載體；
D)通過IPTG誘導煙粉虱重組化學感受蛋白重組表達，并通過鎳瓊脂糖凝膠親和層析柱對其進行純化。
6.根據權利要求5所述的方法，步驟D)中IPTG誘導煙粉虱重組化學感受蛋白表達的誘導條件為：IPTG濃度為0.5mmol/L，溫度為30℃，誘導轉速為200rpm，誘導時間為5h。
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