[發明專利]一種檢測異性孿生母牛SRY相對含量的方法

在審

• 申請號: 201710371156.4
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107058569A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 曹兵海;蘇華維;邱清華;何陽;邵陶祺;姬琳堡
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,何葉喧

技術領域

本發明涉及動物生物技術領域，具體涉及一種檢測異性孿生母牛SRY相對含量的方法。

背景技術

母牛繁殖機理的深入研究和胚胎生物技術的快速發展使得人工誘導母牛雙胎得以成為現實。雙胎中若為異性孿生則公母犢的繁殖力都將受到影響，尤其以母犢受影響最大，有近85％的母犢不具備生育能力。雖然其中仍有15％左右的母犢是可育的，但在實踐生產中，由于缺乏有效的早期鑒別方法，這些可育的母犢常被當做公犢處理或者飼養。

常規PCR技術能對核酸分子進行特異性的定性檢測。實時熒光定量PCR技術在反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累可實現PCR擴增過程中的實時監控和連續性分析，檢測靈敏度和準確性都比常規PCR技術要高。

SRY基因是Y染色體上決定哺乳動物雄性性別的重要基因片段，在系統進化中具有高度的保守性。SRY基因在人類醫學中主要用于檢測性別發育異常患者的染色體組成，分析可能的患病原因，為科學治療疾病提供依據；在動物生產上主要應用在奶牛胚胎性別鑒定和性別控制上。

目前認為，異性孿生母牛不育是由于發育較早的雄性胎兒產生的激素及XY細胞通過共用的尿囊膜之間的血管吻合支影響了雌性胎兒的生殖系統發育。因此，異性孿生不育母牛體內存在XX/XY嵌合體，檢測XX/XY嵌合體的存在為鑒別異性孿生母牛是否可育提供了一個可能的途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測異性孿生母牛SRY相對含量的方法。

本發明首先保護引物對I，由引物SRY-F和引物SRY-R組成；

所述引物SRY-F為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物SRY-R為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代且與序列2具有相同功能的DNA分子。

本發明還保護引物組合，由所述引物對I和引物對II組成；

所述引物對II由引物GAPDH-F和引物GAPDH-R組成；

所述引物GAPDH-F為如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

(b2)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代且與序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物GAPDH-R為如下(b3)或(b4)：

(b3)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

(b4)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代且與序列4具有相同功能的DNA分子。

本發明還保護所述引物對I或所述引物組合的應用，為如下(c1)-(c6)任一種：

(c1)檢測SRY相對含量；

(c2)制備用于檢測SRY相對含量的試劑盒；

(c3)檢測異性孿生母牛SRY相對含量；

(c4)制備用于檢測異性孿生母牛SRY相對含量的試劑盒；

(c5)鑒別異性孿生母牛是否可育；

(c6)制備用于鑒別異性孿生母牛是否可育的試劑盒。

本發明還保護含有所述引物對I或所述引物組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為如下(d1)或(d2)或(d3)：

(d1)檢測SRY相對含量；

(d2)檢測異性孿生母牛SRY相對含量；

(d3)鑒別異性孿生母牛是否可育。

所述試劑盒還包括2×SYBR Green Master(Rox)和超純去離子水。

所述2×SYBR Green Master具體可為購買自Roche的貨號為04 913 850 001的產品。

所述超純去離子水為不含DNA和RNA降解酶的無菌水(DNase/RNase-Free water)。

所述含有所述引物組合的試劑盒組分具體可如表4所示。所述目標引物SRY由引物SRY-F和引物SRY-R組成。引物SRY-F和引物SRY-R的濃度均為10μM。所述內參引物GAPDH由引物GAPDH-F和引物GAPDH-R組成。引物GAPDH-F和引物GAPDH-R的濃度均為10μM。

本發明還保護以上任一所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。