[發明專利]一種檢測卡那霉素的比色檢測探針及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710370563.3
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107389568B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 干寧;欒倩;周游
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發明涉及一種檢測卡那霉素的比色檢測探針，其制備方法包括如下步驟：(1)將氨基化適配體Apt與氨基化的磁珠MB在偶聯劑的作用下結合成捕獲探針；(2)將單鏈DNA結合蛋白SSB修飾到合成好的金屬有機框架MOF?Pt復合材料的表面來形成信號探針；(3)將步驟1的捕獲探針和步驟2的信號探針通過單鏈DNA結合蛋白和適配體Apt之間的親和性形成復合探針，還提供了該探針在檢測卡那霉素的方法，該檢測方法不需要依賴大型儀器設備，且具有較低的檢測限，同時，該比色檢測探針還表現出良好的特異性和選擇性，該方法操作簡單快速，借助手持型比色計就可以實現卡那霉素殘留的現場檢測，并且實驗結果肉眼可視。

技術領域

本發明涉及環境科學、檢驗化學及分析化學領域，具體涉及一種基于無酶催化的比色方法檢測牛奶中卡那霉素殘留的比色檢測探針及其檢測方法。

背景技術

卡那霉素(KANA)作為一種小分子藥物，敏感菌所致的腸道感染及用作腸道手術前準備，并有減少腸道細菌產生氨的作用，對肝硬化消化道出血病人的肝昏迷有一定防止作用。但是當人體內的KANA累積到一定程度的時候就會產生一定的副作用，比如紅斑皮疹，聽力減退、耳鳴或耳部飽滿感(耳毒性)以及腎毒癥等，并且長期體內積累的KANA會讓人產生抗藥性從而對人體健康構成巨大的威脅。

目前，已經開發了許多檢測KANA的方法，常見的有比色法，熒光法(FL)，電化學法(EC)，電化學發光法(ECL)以及高效液相色譜法(HPLC)。其中比色法由于其簡單的構建方式以及可以快速反饋結果的優勢得到了許多研究者的青睞。更重要的是該方法還具有結果肉眼可視性的優點，利用肉眼就可辨別實驗結果，使得實驗結果更簡單、直觀。并且在測定過程中不需要使用大型儀器非常容易推廣，有很好的普遍性，在現場快速檢測方面具有很好的應用和發展前景。但是常見的比色方法是通過辣根過氧化酶來催化一些底物顯色實現目標物檢測，但是酶的活性非常容易受到外界條件的干擾。因此，建立一種無酶催化底物顯色的比色方法是非常有必要的。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是針對現有技術的現狀提供一種無酶快速檢測卡那霉素的比色檢測探針。

本發明所要解決的另一個技術問題是針對現有技術的現狀提供一種利用上述比色檢測探針快速檢測牛奶中卡那霉素的方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：本檢測卡那霉素的比色檢測探針，其特征在于：其制備方法包括如下步驟：

(1)將氨基化適配體Apt與氨基化的磁珠MB在偶聯劑的作用下結合成捕獲探針MB-Apt；所述氨基化適配體Apt的序列為5’-NH₂(CH₂)₆-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3’；

(2)將單鏈DNA結合蛋白SSB修飾到合成好的金屬有機框架MOF-Pt復合材料的表面來形成信號探針MOF-Pt-SSB；

(3)將步驟1的捕獲探針和步驟2的信號探針通過單鏈DNA結合蛋白和適配體Apt之間的親和性形成復合探針MB-Apt-SSB-MOF-Pt。

進一步地，所述步驟(2)中的金屬有機框架MOF-Pt復合材料的合成步驟為：

(1)先合成含鐵金屬有機骨架化合物Fe-MIL-88；

(2)再合成PVP功能化的Pt NPs；

(3)最后將步驟(2)的Pt NPs-PVP滴入步驟(1)中的Fe-MIL-88溶液中反應2～7h，Pt NPs-PVP與Fe-MIL-88的配比為1:2～4:1，最后離心收集MOF-Pt復合材料；