[發明專利]一種檢測卡那霉素的比色檢測探針及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710370563.3
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107389568B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 干寧;欒倩;周游
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種檢測卡那霉素的比色檢測探針，其特征在于：其制備方法包括如下步驟：

(1)將氨基化適配體Apt與氨基化的磁珠MB在偶聯劑的作用下結合成捕獲探針MB-Apt；所述氨基化適配體Apt的序列為5’-NH₂(CH₂)₆-AGA TGG GGG TTG AGG CTA AGC CGA-3’；

(2)將單鏈DNA結合蛋白SSB修飾到合成好的金屬有機框架MOF-Pt復合材料的表面來形成信號探針MOF-Pt-SSB；

(3)將步驟1的捕獲探針和步驟2的信號探針通過單鏈DNA結合蛋白和適配體Apt之間的親和性形成復合探針MB-Apt-SSB-MOF-Pt。

2.根據權利要求1中的檢測卡那霉素的比色檢測探針，其特征在于：所述步驟(2)中的金屬有機框架MOF-Pt復合材料的合成步驟為：

(1)先合成含鐵金屬有機骨架化合物Fe-MIL-88；

(2)再合成PVP功能化的Pt NPs；

(3)最后將步驟(2)的Pt NPs-PVP滴入步驟(1)中的Fe-MIL-88溶液中反應2～7h，PtNPs-PVP與Fe-MIL-88的配比為1:2～4:1，最后離心收集MOF-Pt復合材料；

所述步驟(1)中合成含鐵金屬有機骨架化合物Fe-MIL-88的方法為：分別稱取0.118～0.354g對苯二甲酸和0.187～0.561g FeCl₃ 6H₂O溶于15～45mL N，N-二甲基甲酰胺中，之后加入3.45～7.90mmol醋酸溶液，油浴110～120℃反應3～4h，冷卻到室溫收集沉淀；

所述步驟(2)中合成PVP功能化的Pt NPs的方法為：16.6～33.2mg PVP溶解在45～60mL乙醇中，之后將5～10mL氯鉑酸逐滴加入，然后在室溫下攪拌反應2～5min，最后回流3～7h收集沉淀得Pt NPs-PVP。

3.一種利用如權利要求1所述的比色檢測探針檢測卡那霉素的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)構建含有已知卡那霉素濃度的檢測體系，繪制標準曲線；

(2)將捕獲探針MB-Apt與信號探針MOF-Pt-SSB混勻孵育，制備出復合探針MB-Apt-SSB-MOF-Pt，所述捕獲探針MB-Apt與信號探針MOF-Pt-SSB按1:2～1:4的比例混勻；并在4～20℃下反應12～24h形成復合探針；

(3)將步驟(2)的復合探針與待測的目標物卡那霉素混勻孵育之后磁性分離取出上清液，所述復合探針與待測的目標物卡那霉素按1:1～1:4的比例混勻；

(4)向步驟(3)中的上清液中加入50～70μL 2～7M雙氧水H₂O₂和50～70μL 5～10mM3,3',5,5'-四甲基聯苯胺TMB，測定混合溶液在650nm處吸光度值，并通過步驟(1)中的標準曲線來判斷待測的目標物卡那霉素的含量。

4.根據權利要求3所述的比色檢測探針檢測卡那霉素的方法，其特征在于所述步驟(1)中的檢測體系通過以下步驟制備得到：

①制備已知濃度的氯霉素檢測體系：取5～10只離心管，各離心管分別加入等體積的復合探針和不同濃度的卡那霉素標準液，充分混勻后置于25～35℃條件下孵育20～40min，之后磁性分離取出上清液；

②制備空白對照體系溶液，取1支離心管將卡那霉素標準液用磷酸緩沖溶液PBS替代，其他按步驟①處理后作為空白對照體系溶液。