[發(fā)明專利]一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710369428.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107056863A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴勤;王冬梅;李慧珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖歐標(biāo)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C07H21/02
• 分類號(hào): C07H21/02;C07H1/08
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11427
• 代理人: 黃枝傳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，屬植物提取技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

從植物中提取多糖多酚小RNA，是當(dāng)前開(kāi)展植物研究工作的重要前提，當(dāng)前在進(jìn)行植物多糖多酚小RNA提取作業(yè)時(shí)，主要是通過(guò)大量使用裂解液、沉淀劑等方式實(shí)現(xiàn)對(duì)植物中小RNA提取作業(yè)的需要，雖然這種方式可有效的獲得植物相關(guān)多糖多酚小RNA提取物，但在實(shí)際工作中法，當(dāng)前的提取方法獲得植物小RNA往往均不能有小的對(duì)植物所含的多糖多酚進(jìn)行有效的清理，從而導(dǎo)致提取得到的植物小RNA中含有大量的雜質(zhì)，從而導(dǎo)致后續(xù)小RNA檢測(cè)工作難度大，嚴(yán)重影響了檢測(cè)工作的工作效率和精度，除此之外，由于當(dāng)前傳統(tǒng)的植物小RNA提取中，主要依靠大量使用裂解液等原料進(jìn)行，因此也不同程度導(dǎo)致了提取作業(yè)的操作工序存在較大的差異，提取作業(yè)過(guò)程中易產(chǎn)生大量的化學(xué)污染物，因此針對(duì)這一問(wèn)題，迫切需要開(kāi)發(fā)一種全新的植物小RNA提取方式，以滿足實(shí)際使用的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的就在于克服上述不足，提供一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：

一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長(zhǎng)旺盛且無(wú)病蟲(chóng)害的植物組織，將截取的植物組織通過(guò)液氮進(jìn)行凍干，并在-80℃—-40℃環(huán)境中進(jìn)行保存從而獲得成品提取基材；

第二步，制備提取液，將第一步制備的提取基材置于液氮預(yù)冷的研磨設(shè)備中進(jìn)行研磨作業(yè)，制備得到80—200目的粉末狀植物組織，然后將粉末狀植物組織添加到CTAB裂解液中并混合均勻，然后將混合物在20℃—40℃環(huán)境中靜置3—10分鐘，且靜置后的混合物溫度為0℃—10℃；其中研磨作業(yè)時(shí)，研磨溫度不高于-40℃；

第三步，一次離心作業(yè)，將第二步制備的混合物防治到離心機(jī)上，在0℃—10℃恒定溫度下，以10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后將離心得到的液體通過(guò)真空負(fù)壓分離設(shè)備進(jìn)行固液分離，然后在分離后的液體中加入Trizol試劑并攪拌均勻后靜置1—5分鐘，然后在分離后的液體中加入濃度為15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并攪拌均勻，然后靜置10—30分鐘；

第四步，二次離心作業(yè)，將第三步制備的過(guò)濾液在0℃—10℃恒定環(huán)境下添加到離心機(jī)中，并向過(guò)濾液中添加入異丙醇，然后由離心機(jī)對(duì)混合物以10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后將混合液在-40℃—0℃環(huán)境中靜置1—3小時(shí)，然后將混合液溫度自然升溫至0℃—4℃后，以離心機(jī)在10000—22000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心操作5—10分鐘，然后靜置5—10分鐘，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物備用；

第五步，提純，向第四步中制備得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，對(duì)沉淀物進(jìn)行清洗，然后將清洗后的沉淀物自然陰干，然后由有機(jī)溶劑對(duì)干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。

進(jìn)一步的，所述的第二步中，CTAB裂解液的濃度為2％，CTAB裂解液的使用量與粉末狀植物組織量的比為1：1—5。

進(jìn)一步的，所述的Trizol試劑的濃度為2％—20％，且分離后的液體量與Trizol試劑使用量的比為1：1.5—5。

進(jìn)一步的，所述的15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比為1：1—1.5，15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的總量與分離后的液體量比為1：2—10。

進(jìn)一步的，所述的第四步中，異丙醇使用量為過(guò)濾液總量的1/10—1/3。

本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便且操作效率高，一方面可極大的提高多糖多酚小RNA提取做的的工作效率和純度，降低提取作業(yè)的工作成本及提取作業(yè)中污染性原料的使用量，另一方面本發(fā)明實(shí)施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小RNA提取作業(yè)的規(guī)范性和標(biāo)準(zhǔn)型，便于多糖多酚小RNA提取作業(yè)技術(shù)的交流和經(jīng)驗(yàn)積累。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明流程示意圖；

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

如圖1所示，一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長(zhǎng)旺盛且無(wú)蟲(chóng)害的植物組織，將截取的植物組織通過(guò)液氮進(jìn)行凍干，并在-40℃環(huán)境中進(jìn)行保存從而獲得成品提取基材；