[發明專利]一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法

在審

• 申請號: 201710369428.7
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107056863A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 戴勤;王冬梅;李慧珍
• 申請（專利權）人: 蕪湖歐標農業發展有限公司
• 主分類號: C07H21/02
• 分類號: C07H21/02;C07H1/08
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙)11427
• 代理人: 黃枝傳

1.一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的高效植物多糖多酚小RNA提取方法包括以下步驟：

第一步，制備提取基材，首先選取生長旺盛且無病蟲害的植物組織，將截取的植物組織通過液氮進行凍干，并在-80℃—-40℃環境中進行保存從而獲得成品提取基材；

第二步，制備提取液，將第一步制備的提取基材置于液氮預冷的研磨設備中進行研磨作業，制備得到80—200目的粉末狀植物組織，然后將粉末狀植物組織添加到CTAB裂解液中并混合均勻，然后將混合物在20℃—40℃環境中靜置3—10分鐘，且靜置后的混合物溫度為0℃—10℃；其中研磨作業時，研磨溫度不高于-40℃；

第三步，一次離心作業，將第二步制備的混合物防治到離心機上，在0℃—10℃恒定溫度下，以10000—22000轉/分鐘的轉速離心操作5—10分鐘，然后將離心得到的液體通過真空負壓分離設備進行固液分離，然后在分離后的液體中加入Trizol試劑并攪拌均勻后靜置1—5分鐘，然后在分離后的液體中加入濃度為15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并攪拌均勻，然后靜置10—30分鐘；

第四步，二次離心作業，將第三步制備的過濾液在0℃—10℃恒定環境下添加到離心機中，并向過濾液中添加入異丙醇，然后由離心機對混合物以10000—22000轉/分鐘的轉速離心操作5—10分鐘，然后將混合液在-40℃—0℃環境中靜置1—3小時，然后將混合液溫度自然升溫至0℃—4℃后，以離心機在10000—22000轉/分鐘的轉速離心操作5—10分鐘，然后靜置5—10分鐘，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物備用；

第五步，提純，向第四步中制備得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，對沉淀物進行清洗，然后將清洗后的沉淀物自然陰干，然后由有機溶劑對干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。

2.根據權利要求1所述的一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的第二步中，CTAB裂解液的濃度為2％，CTAB裂解液的使用量與粉末狀植物組織量的比為1：1—5。

3.根據權利要求1所述的一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的Trizol試劑的濃度為2％—20％，且分離后的液體量與Trizol試劑使用量的比為1：1.5—5。

4.根據權利要求1所述的一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比為1：1—1.5，15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的總量與分離后的液體量比為1：2—10。

5.根據權利要求1所述的一種高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的第四步中，異丙醇使用量為過濾液總量的1/10—1/3。