[發明專利]一種提高m6A抗體富集甲基化mRNA產量的方法在審
| 申請號： | 201710369026.7 | 申請日： | 2017-05-23 |
| 公開（公告）號： | CN107312772A | 公開（公告）日： | 2017-11-03 |
| 發明（設計）人： | 鐘翔;余嘉瑤;李興美;李毅;王恬;張莉莉;王超 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司32218 | 代理人： | 徐冬濤,李曉峰 |
| 地址： | 211225 江蘇省南京市溧*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 m6a 抗體 富集 甲基化 mrna 產量 方法 | ||
1.一種用于洗脫m6A和甲基化mRNA復合物的洗脫液，其特征在于：該洗脫液包含以下組分：NaCl：0～0.2M；Tris：1～20mM，pH 8.0；EDTA：0.5～5mM；SDS：0.01～0.5；proteinase k：1～300μg/mL。
2.根據權利要求1所述的洗脫液，其特征在于：包含以下組分：NaCl：0.05～0.2M；Tris：5～20mM，pH 8.0；EDTA：0.5～5mM；SDS：0.01～0.2；proteinase k：100～300μg/mL。
3.權利要求1或2所述的洗脫液在提高m6A抗體富集甲基化mRNA產量中的應用。
4.一種提高m6A抗體富集甲基化mRNA產量的方法，其特征在于：對制備的m6A和甲基化mRNA的復合物采用洗脫液進行洗脫分離m6A和mRNA，從而獲得甲基化mRNA，所述的洗脫液包含以下組分：NaCl：0～0.2M；Tris：1～20mM，pH 8.0；EDTA：0.5～5mM；SDS：0.01～0.5；proteinase k：1～300μg/mL。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述的洗脫液包含以下組分：NaCl：0.05～0.2M；Tris:5～20mM,pH 8.0；EDTA:0.5～5mM；SDS:0.01～0.2；proteinase k:100～300μg/mL。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述洗脫的時間為40～120min。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述洗脫的溫度為37～60℃。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：洗脫時，所述洗脫液的體積為50～300μL。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述洗脫液的體積為100～300μL。
10.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：制備m6A和甲基化mRNA的復合物的過程為：提取細胞總RNA，然后從總RNA中分離提取mRNA，接著采用m6A抗體與mRNA進行免疫共沉淀，將具有m6A甲基化修飾的mRNA抓取，獲得m6A抗體和甲基化mRNA的復合物，最后通過洗脫液分離m6A和mRNA，從而獲得甲基化mRNA。
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