[發明專利]一種利用雞胚血管系統檢測和評價結膜刺激性及粘膜刺激性的方法

在審

• 申請號: 201710368626.1
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107271653A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 秦瑤;程樹軍;陳志杰
• 申請（專利權）人: 秦瑤;廣州市華代生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司44104
• 代理人: 周克佑

技術領域

本發明屬于結膜刺激性及粘膜刺激性技術領域，具體涉及一種利用雞胚血管系統檢測和評價結膜刺激性及粘膜刺激性的方法。

背景技術

隨著生活水平的提高，越來越多的人開始使用個人護理和清潔用品，前者如皮膚用和眼用產品，后者如口腔清潔和護理產品。大多數消費者在使用這些產品過程中都非常關心其安全性問題，其中包括使用產品后無意接觸眼睛產生的結膜和角膜刺激問題；以及口腔護理品對口腔粘膜和牙齦的刺激；女性護理產品對陰道粘膜的刺激等。因此，個人護理和清潔產品的監管要求必須對產品的健康危害進行檢測。同時，在這些產品的研發過程中，粘膜刺激性的檢測和評估也貫穿其中。例如對于候選原料(如植物提取物、合成化學品)和配方，通常需要反復測試其眼結膜刺激性和口腔粘膜刺激性，并希望能夠精確定量不同配方或產品的刺激程度。此外，對于大量未知毒性特征的化學品，也需要準確了解包括結膜刺激性和粘膜刺激性在內的毒性特點，以用于危險化學品的分類和標識。

化學品、個人護理品或其它眼睛接觸物質引起的結膜刺激性，主要指的是這些物質有意或無意直接接觸眼睛后引起的眼結膜及其周圍粘膜的可逆性炎性變化，這些物質如淋洗類化妝品、眼部和面部用化妝品、眼部藥物、噴酒類農藥、空氣清新劑、空氣顆粒物和漂浮物、PM2.5等。消費者通常希望購買的產品是符合產品安全標準要求的，而且更加希望產品無任何刺激性的或者是溫和的，能夠適用于皮膚敏感、嬰幼兒等特殊人群。

個人護理和清潔用品引起口腔粘膜的刺激性，主要指的是用于牙齒、口腔、口唇等部位的產品，接觸到口腔粘膜后引起的粘膜、口唇、牙齦及其周圍組織的可逆性炎性變化，這些物質包括牙膏、漱口水、牙貼膜、牙膠等

由于衛生清潔、個人護理等產品使用頻率的增加，上述粘膜刺激相關的不良反應的發生越來越普遍。另一方面，消費者對于產品安全性的要求也越來越高，因此有必要在現有的檢測方法的基礎上，建立一些更快速和更敏感的檢測和評估方法。

現有的外源物質粘膜刺激性的方法可分為動物模型、細胞法和人體試驗三類。

傳統的動物模型檢測結膜刺激性，也是將一定量的受試物滴入實驗動物(通常為家兔)的眼睛內，經一定時間間隔后，觀察受試動物眼睛結膜、角膜和虹膜的變化，以評估該受試物是否有眼刺激性。同樣，傳統檢測口腔粘膜刺激性，是將一定量的受試物通過手術埋入實驗動物(通常為金黃地鼠)的口腔頰囊內，經一定時間間隔后，處死動物，收集口腔頰囊組織，觀察口腔粘膜的病理變化，以評估該受試物是否有口腔粘膜刺激性。采用動物作為試驗對象檢測消費品的安全性，其缺點是成本高、周期長，很少使用現代生物科技發展的成果，還給動物帶來了極大痛苦，存在道德和倫理上的問題。除此之外，動物實驗環境條件苛刻(動物需要飼養在恒溫恒濕的室內環境)、動物質量要求嚴格(要求符合質量等級的要求)、檢測門檻高(檢測機構需要取得實驗動物使用許可證)，又與人的實際使用情況相差太遠，而且由于動物和人之間存在種屬差異，使用動物皮膚評價人體皮膚的安全風險使結果的可信度降低。

隨著大量新的物質用于藥品和化妝品，我們需要更多的方法來評價這些物質的安全性。同時，為了遵循生命和醫學研究中的3R原則(減少、優化和代替動物實驗)，以及把現代生物科技的成果應用于人類健康危害評估(如細胞培養、組織工程、組學和基因技術等)。從10年前開始，全球范圍內開展了面向21世紀的毒性測試為核心的毒理學的現代化計劃。大量的非動物的替代方法應用于健康危害的檢測和安全評估中，有的方法已被世界經濟合作的發展組織(OECD)、歐洲替代方法驗證中心(ECVAM)和美國替代方法部門間協調驗證中心 (ICCVAM)等機構認可并定為檢測指南。

目前的體外檢測化學物質結膜刺激性的方法主要有OECD指南435、437、 460、492等，其中435是早期認可的替代方法，以離體兔眼為測試對象，已逐漸被不使用實驗動物材料的方法取代。437是檢測眼刺激的牛角膜混濁和滲透性試驗，以屠宰場的廢棄材料為試驗系統檢測化學品和產品的眼刺激性，其優點是適用于幾乎所有原料和產品的檢測，缺點是國內材料來源困難，主要評估角膜的損傷，無法檢測結膜的刺激性。460是采用單層細胞培養的方法，主要適用于表面活性劑等化學品的檢測，其缺點是不適用于檢測難溶解、有顏色的化學物，也不適用于測試劑型和成份復雜的提取物、配方和成品。492是組織工程角膜的方法，需要使用商品化的人工角膜模型，目前國內尚無法生產類似產品，也無法有效進口，其次人工角膜模型價格昂貴，不適用于大量日常檢測。