[發明專利]一種抗菌脂肽皮脂膜修復組合物及其應用

在審

• 申請號: 201710368562.5
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107184953A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 楚杰;劉可春;劉亞萍;王瑩;靳夢;王希敏;陳維云
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生物研究所
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61K38/12;A61K9/70;A61K47/32;A61P17/02;C12P21/00;C07K1/30;A61F13/00;A61K38/08;A61K31/722;C12R1/125
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司37219
• 代理人: 朱家富

1.一種皮脂膜修復組合物，其特征在于，藥效成分如下，均為重量份：

羧甲基殼聚糖2～5份，幾丁糖0.5～2份，聚丙烯酸鈉1～2份，抗菌肽2～3份，脂肽類抗生素2～3份；

所述抗菌肽、抗脂肽類抗生素為將枯草芽孢桿菌發酵液經分離步驟后，通過提取抗菌肽、抗脂肽類抗生素獲得；

所述為將枯草芽孢桿菌發酵液經分離步驟后，通過提取抗脂肽類抗生素步驟獲得。

2.如權利要求1所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，藥效成分如下，均為重量份：

羧甲基殼聚糖5份，幾丁糖2份，聚丙烯酸鈉1.5份，抗菌肽3份，脂肽類抗生素3份。

3.如權利1所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌發酵液采用如下方法制備：

(1)將枯草芽孢桿菌接種于液體培養基中進行活化培養至對數生長期，制得活化菌體；

所述液體培養基組分如下，均為重量百分比：

酵母膏0.5～1％，蛋白胨0.7～1％，氯化鈉0.5～1.2％，余量水，pH7.0～7.2；

(2)將步驟(1)制得的活化菌體按體積百分比3～5％接種于液體發酵培養基中，在28～38℃下，發酵培養24～48小時，制得微生物發酵液；

所述液體發酵培養基組分如下，均為重量百分比：

酵母膏0.1～0.3％，蛋白胨0.7～1％，葡萄糖1～1.5％，L-谷氨酸0.1～0.5％，谷氨酸鈉0.1～0.5％，L-苯丙氨酸0.1～0.5％，淀粉0.05～0.1％，糊精0.05～0.1％，磷酸二氫鉀0.07～0.1％，硫酸鎂0.01～0.05％，氯化鉀0.01～0.05％，余量水，pH7.0～7.2。

4.如權利要求3所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述分離步驟如下：

(i)將微生物發酵液在4℃、8000r/min的條件下離心15～20min，取上清，調pH至2.0～2.5，4℃沉淀1h，然后10000r/min的條件下離心15～20min，取沉淀，用體積百分比濃度為70％的甲醇溶液溶解提取2～4次，調pH值至中性，經旋轉蒸發儀除去甲醇后真空干燥，制得抗菌粗提物；

(ii)將步驟(i)制取的抗菌粗提物經甲醇溶解，0.45μM微孔濾膜過濾，上樣于Sephadex LH-20柱，分段收集樣品，通過TLC檢測，獲得含抗菌肽和脂肽類抗生素的餾分。

5.如權利要求4所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述步驟(i)中，pH調節劑為5.5～6.5mol/L的HCl。

6.如權利要求4所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述步驟(i)中，真空干燥條件為40℃真空干燥55～65min；

進一步優選的，所述步驟(i)中，所述甲醇溶液溶解提取時間為2小時，提取過程中磁力攪拌，提取后過濾去除沉淀。

7.如權利要求4所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述步驟(ii)中，含抗菌肽和脂肽類抗生素的餾分利用HPLC進行進一步純化。

8.如權利要求1所述的皮脂膜修復組合物，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌為購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，保藏編號為1.1413的枯草芽孢桿菌。

9.一種枯草芽孢桿菌抗菌脂肽皮脂膜修復貼，其特征在于，包括透氣層、壓敏膠層和保護層，壓敏膠層設置于透氣層與保護層之間，權利要求1所述皮脂膜修復組合物涂覆于壓敏膠層的外表面。

10.權利要求9所述枯草芽孢桿菌抗菌脂肽皮脂膜修復貼的制備方法，其特征在于，步驟如下：

a、按重量份比例將羧甲基殼聚糖、幾丁糖和聚丙烯酸鈉混合均勻，然后加入抗菌肽和脂肽類抗生素，加入生理鹽水溶液按重量份補足100份，制得皮脂膜修復組合物溶液；

b、將步驟a制得的皮脂膜修復組合物溶液涂敷于壓敏膠層外表面，然后封裝透氣層和保護層，制得枯草芽孢桿菌抗菌脂肽皮脂膜修復貼。