[發明專利]一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法

有效

• 申請號: 201710368183.6
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107141198B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉靜雯;馬亞瑞;李健;李桂玲
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C07C29/74
• 分類號: C07C29/74;C07C29/76;C07C29/78;C07C33/03;A61P35/00
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 尤懷成

本發明公開了一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,依次以：用乙酸乙酯進行萃取；用反相硅膠柱進行一次層析；用反相硅膠柱進行二次層析；用葡聚糖凝膠柱Sephadex LH?20進行層析；用正相硅膠柱進行層析；用PTLC制備的方法從海洋球石藻中提取葉綠醇。本發明首次對海洋球石藻乙酸乙酯相提取物的葉綠醇進行了分離、純化，并對葉綠醇的細胞毒性進行了研究，以便為后續大規模生產葉綠醇奠定基礎。

技術領域

本發明涉及生物制劑的技術領域，尤其涉及一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法。

背景技術

海洋球石藻(Coccolithophores)是一類單細胞海洋微型浮游植物，隸屬于定鞭藻門(Haptophyta＝Prymnesiophyta)定鞭藻綱(Prymnesiophyceae)。海洋球石藻代謝產物中富含多種生物活性物質，如二十二碳六烯酸(DHA)、聚酮類化合物等，尤其是海洋微藻細胞中總脂含量最高可達細胞干重的50％，這些化合物具有良好的抑菌、抗氧化、抗腫瘤等生物功能，在生物技術領域具有廣闊的應用前景。但目前有關海洋球石藻脂類活性物質領域的研究較少。

有鑒于此，本發明人研究和設計了一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法，旨在通過薄層層析法、硅膠柱層析法、凝膠柱層析法、制備型薄層PTLC等方法對海洋球石藻乙酸乙酯相提取物的葉綠醇進行分離、純化，以便于后續大規模化生產葉綠醇。

為了解決上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,依次以：用乙酸乙酯進行萃取；用反相硅膠柱進行一次層析；用反相硅膠柱進行二次層析；用葡聚糖凝膠柱Sephadex LH-20進行層析；用正相硅膠柱進行層析；用PTLC制備的方法從海洋球石藻中提取葉綠醇。

作為實施例的優選方式，上述提取葉綠醇的方法具體包括以下步驟：

步驟一、制備海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，獲得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯為萃取劑進行萃取處理，合并萃取液，減壓濃縮得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

作為實施例的優選方式，海洋球石藻生長至穩定期，收獲，冷凍干燥獲得海洋球石藻藻粉，用質量分數為75％的乙醇溶液浸提，獲得乙醇浸膏，加入等體積的乙酸乙酯和水，反復萃取，收集乙酸乙酯相，合并、減壓濃縮至干，獲得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

步驟二、反相硅膠柱層析制備葉綠醇一次粗品：將獲得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到葉綠醇一次粗品；

作為實施例的優選方式，將海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用適量的分析純甲醇溶解，加入量以甲醇正好沒過萃取物為宜，進行反相硅膠柱層析；依次用水，質量分數為25％的甲醇溶液，質量分數為50％的甲醇溶液，質量分數為75％的甲醇溶液，甲醇洗脫，每個梯度洗脫1.5L，流速控制為30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并葉綠醇高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇一次粗品；

步驟三、反相硅膠柱層析制備葉綠醇二次粗品：將獲得的葉綠醇一次粗品以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到葉綠醇二次粗品；

作為實施例的優選方式，將葉綠醇一次粗品，依次采用質量體積分數為65％，70％，75％，80％，85％的甲醇溶液梯度進行反相硅膠柱層析，每個梯度洗脫300mL，流速控制為30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并葉綠醇高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇二次粗品；