[發明專利]一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法

有效

• 申請號: 201710368183.6
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN107141198B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 劉靜雯;馬亞瑞;李健;李桂玲
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C07C29/74
• 分類號: C07C29/74;C07C29/76;C07C29/78;C07C33/03;A61P35/00
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 尤懷成

1.一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、制備海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，獲得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯為萃取劑進行萃取處理，合并萃取液，減壓濃縮得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

步驟二、反相硅膠柱層析制備葉綠醇一次粗品：將獲得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到葉綠醇一次粗品；

步驟三、反相硅膠柱層析制備葉綠醇二次粗品：將獲得的葉綠醇一次粗品以反相硅膠柱進行層析處理，收集，檢測、合并、減壓濃縮至干，得到葉綠醇二次粗品；

步驟四、將葉綠醇二次粗品用適量甲醇溶解后，上葡聚糖凝膠柱Sephadex LH-20，用甲醇作為洗脫劑進行洗脫，流速控制8S/drop，使用自動收集器收集各餾分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并142至167管的餾分，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇一次精品；

步驟五、正相硅膠柱層析制備葉綠醇二次精品：將葉綠醇一次精品經過正相硅膠柱層析，用硅膠粉拌樣，硅膠用石油醚飽和后裝柱，樣品上柱后用正己烷乙醚的體系進行洗脫，所述正己烷和乙醚的體積比為9:1，收集餾分，合并9-15管，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇二次精品；

步驟六、PTLC制備葉綠醇：將獲得的葉綠醇二次精品進行PTLC，點樣、展開，刮板，樣品回收，保存于-20℃，得到葉綠醇純品。

2.如權利要求1所述的一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,其特征在于：所述步驟一的具體方法為：海洋球石藻生長至穩定期，收獲，冷凍干燥獲得海洋球石藻藻粉，用質量分數為75％的乙醇溶液浸提，獲得乙醇浸膏，加入等體積的乙酸乙酯和水，反復萃取，收集乙酸乙酯相，合并、減壓濃縮至干，獲得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物。

3.如權利要求1所述的一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,其特征在于：所述步驟二的具體方法為：將海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用適量的分析純甲醇溶解，加入量以甲醇正好沒過萃取物為宜，進行反相硅膠柱層析；依次用水，質量分數為25％的甲醇溶液，質量分數為50％的甲醇溶液，質量分數為75％的甲醇溶液，甲醇洗脫，每個梯度洗脫1.5L，流速控制為30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并葉綠醇高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇一次粗品。

4.如權利要求1所述的一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,其特征在于：所述步驟三的具體方法為：將葉綠醇一次粗品，依次采用質量體積分數為65％，70％，75％，80％，85％的甲醇溶液梯度進行反相硅膠柱層析，每個梯度洗脫300mL，流速控制為30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并葉綠醇高濃度流分段，減壓濃縮至干，獲得葉綠醇二次粗品。

5.如權利要求1所述的一種從海洋球石藻中提取葉綠醇的方法,其特征在于：所述步驟六的具體方法為：將葉綠醇二次精品經過PTLC，最終得到葉綠醇：采用高效薄層層析板，在體積比為：石油醚：乙酸乙酯＝8：1的展開劑中展開，前后兩端顯色，用刀片刮取中間部分，合并，用甲醇溶解，高速離心，收集上清液，減壓濃縮至干，最終得到葉綠醇。