[發(fā)明專利]一種篩檢細菌的方法及采用特征元素篩檢六種致病菌的方法

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• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107190047A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設計）人: 張鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 張鵬
• 主分類號: C12Q1/14
• 分類號: C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;G01N27/62;C12R1/445;C12R1/42;C12R1/19;C12R1/01;C12R1/085;C12R1/63
• 代理公司: 深圳市興科達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司44260
• 代理人: 易敏

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于細菌篩檢技術(shù)領域，具體的說，涉及一種篩檢細菌的方法及采用特征元素篩檢六種致病菌的方法。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)意義上來說，細菌的檢測由最初的顯微鏡鏡下形態(tài)分析和動物實驗，過渡到各種生化反應的鑒別實驗，鑒別的特異性顯著提高。隨著檢測設備的發(fā)展，細菌鑒定儀和PCR技術(shù)的使用，使得細菌的鑒定速度顯著提升。

其中細菌鑒定儀是通過不同細菌有不同的生化反應，從而導致鑒定卡上顏色的變化，對照現(xiàn)有的譜圖進行鑒別。雖然細菌鑒定儀的優(yōu)點是能更方便的進行藥敏實驗，但其最大的缺點是完全不能受雜菌的干擾，不管是在培養(yǎng)階段還是在鑒定階段，一旦實驗過程中被雜菌所污染，雜菌就會導致生化反應異常，可能造成結(jié)果的誤判。

而PCR法進行檢測對場地的要求比較高，雖然用熒光定量PCR可以避免后期的電泳階段，但前期提取核酸階段不但操作繁瑣，而且容易污染實驗室。PCR法檢測需要找到對應的引物，但現(xiàn)在被研究出來公認的引物數(shù)量比較少，這也極大的限制了該儀器的應用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種篩檢細菌的方法及采用特征元素篩檢六種致病菌的方法，通過分析各細菌的無機元素含量，找出其中的特征元素，從而達到快速篩查細菌的目的。

本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的：一種篩檢細菌的方法，其關鍵在于：通過檢測細菌中的特征元素，從而實現(xiàn)細菌的快速篩查和鑒別。

進一步地，上述的一種篩檢細菌的方法：通過一種或多種所述特征元素對細菌進行鑒別、篩查。

進一步地，上述的一種篩檢細菌的方法的具體步驟為：將已知細菌接種培養(yǎng)后，再將細菌消解、定容，通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀檢測細菌中常見無機元素的含量，然后對各種細菌中元素的含量進行對比區(qū)分，含量明顯區(qū)別于其他菌的元素選為特征元素，最后將待測細菌進行接種培養(yǎng)后再將細菌消解、定容，并通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀檢測待測細菌中特征元素的含量進行細菌的篩查和鑒別。

進一步地，上述已知菌株和待測菌株的接種培養(yǎng)具體步驟為：將菌株的雌株接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃震蕩培養(yǎng)24h，12000r/min離心3min，棄去上清液，用超純水反復洗滌三次后，將菌殘渣放置于-70℃過夜，然后將其置于冷凍離心機中-40℃，抽取36h備用。培養(yǎng)處理中仍需要增菌，洗滌、冷凍干燥后方能夠進行上機檢測，其主要目的是去除菌落中的水分，從而使得不同細菌在相同的狀態(tài)下進行比較。還有震蕩培養(yǎng)不但可以使氧氣充分融入培養(yǎng)基，而且可以有效的避免菌量增多后結(jié)成塊狀沉積于培養(yǎng)基底部。從而滿足實驗對細菌的產(chǎn)量的要求。

進一步地，上述已知菌株和待測菌株消解的具體步驟為：將菌體移入聚四氟乙烯罐中，加入2.0ml硝酸，1.0ml過氧化氫，超純水2.0ml，混勻，浸泡30min，將聚四氟乙烯罐放入微波消解儀中，180℃消解20min。

進一步地，上述常見無機元素包括Na、K、Mg、Al、Ca、Fe、Zn、B、Mn、Cu、As、Se、Mo、Cd、Ba、Pb、Th、U、Be、V、Cr、Co、Ni、Ag、Sn、Sb、Hg、Tl。

本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的：一種采用特征元素篩檢六種致病菌的方法，其關鍵在于：將金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、福氏志賀氏菌、大腸桿菌、副溶血弧菌和蠟樣芽孢桿菌接種培養(yǎng)后，再將細菌消解、定容，通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀檢測細菌中28種無機元素的含量，即Na、K、Mg、Al、Ca、Fe、Zn、B、Mn、Cu、As、Se、Mo、Cd、Ba、Pb、Th、U、Be、V、Cr、Co、Ni、Ag、Sn、Sb、Hg和Tl，然后對六種細菌中所述無機元素的含量進行對比區(qū)分，其中含量明顯區(qū)別于其他菌的元素選為特征元素，最后將待測細菌進行接種培養(yǎng)后再將細菌消解、定容，并通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀檢測待測細菌中特征元素的含量進行細菌的篩查和鑒別。

進一步地，上述已知菌株和待測菌株的接種培養(yǎng)具體步驟為：將菌株的雌株接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃震蕩培養(yǎng)24h，12000r/min離心3min，棄去上清液，用超純水反復洗滌三次后，將菌殘渣放置于-70℃過夜，然后將其置于冷凍離心機中-40℃，抽取36h備用。

進一步地，上述已知菌株和待測菌株消解的具體步驟為：將菌體移入聚四氟乙烯罐中，加入2.0ml硝酸，1.0ml過氧化氫，超純水2.0ml，混勻，浸泡30min，將聚四氟乙烯罐放入微波消解儀中，180℃消解20min。

有益效果：