[發(fā)明專(zhuān)利]衍生檢測(cè)甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710363918.6
• 申請(qǐng)日: 2017-05-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106990186B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李敏;馬歡;歐世榮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 成都欣捷高新技術(shù)開(kāi)發(fā)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 成都九鼎天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51214
• 代理人: 陶海燕;房云

本發(fā)明公開(kāi)了一種衍生檢測(cè)甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法，所述甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)如式I和式II所示，該方法包括步驟：A、衍生樣品：取異構(gòu)體混合物溶于非質(zhì)子試劑中，溶解，然后加入間氯苯甲酸或N?溴代丁二酰亞胺，于室溫下反應(yīng)后，揮干溶劑；B、用流動(dòng)相溶解揮干的樣品，吸取10μl注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定；C、用高效液相色譜檢測(cè)衍生化后的樣品溶液，色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱；采用流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫。本發(fā)明所提供的檢驗(yàn)方法可分離并且檢驗(yàn)甾體類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體，同時(shí)檢驗(yàn)精密度高、重復(fù)性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種衍生測(cè)定甾體類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法。

背景技術(shù)

5α-雄甾-2-烯-17-酮在醫(yī)藥領(lǐng)域尤其在甾體激素方面占有重要地位，是合成環(huán)硫雄醇、抗心律失常藥安律酮和肌肉松弛藥泮庫(kù)溴銨、維庫(kù)溴銨、哌庫(kù)溴銨、羅庫(kù)溴銨等的中間體。

5α-雄甾-2-烯-17-酮作為多種藥物的重要中間體，在合成過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生3,4-雙鍵異構(gòu)體即5α-雄甾-3-烯-17-酮。由于5α-雄甾-3-烯-17-酮與5α-雄甾-2-烯-17-酮的結(jié)構(gòu)與極性非常接近，這個(gè)雜質(zhì)較難通過(guò)精制除去或通過(guò)后續(xù)反應(yīng)除去。又由于5α-雄甾-3-烯-17-酮與5α-雄甾-2-烯-17-酮的反應(yīng)位點(diǎn)與活性及其相似，在后續(xù)反應(yīng)中會(huì)和相同的反應(yīng)物產(chǎn)生相似的反應(yīng)生成更多結(jié)構(gòu)類(lèi)似的雜質(zhì)，從而影響下游產(chǎn)品的質(zhì)量。因此，在后續(xù)中間體的質(zhì)量研究時(shí)，需要關(guān)注5α-雄甾-2-烯-17-酮與5α-雄甾-3-烯-17-酮的去向與限度。而實(shí)驗(yàn)證明，在現(xiàn)有的常規(guī)液相色譜條件下，這兩種異構(gòu)體無(wú)法實(shí)現(xiàn)完全基線(xiàn)分離。

發(fā)明內(nèi)容

在對(duì)甾體類(lèi)化合物進(jìn)行藥物分析的研究過(guò)程中，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，因?yàn)殓摅w類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體相對(duì)分子量相等，logP值相等，理化性質(zhì)類(lèi)似，盡管采用手性柱和常規(guī)的流動(dòng)相也很難將各成份在同一色譜條件下較好的實(shí)現(xiàn)基線(xiàn)分離。如果兩個(gè)雜質(zhì)部分交叉無(wú)法實(shí)現(xiàn)基線(xiàn)分離，則檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。對(duì)后續(xù)研究中異構(gòu)體的去向與限度無(wú)法控制。

為彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)缺乏分離檢測(cè)甾體類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體技術(shù)的不足，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)和研究，最終獲得一種衍生檢測(cè)甾體類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法，能夠?qū)崿F(xiàn)甾體類(lèi)化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的有效分離，還能夠準(zhǔn)確測(cè)定異構(gòu)體的限度，專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度高；該操作方法簡(jiǎn)單，具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，可用該方法對(duì)異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行有效的監(jiān)測(cè)和控制。

本發(fā)明衍生檢測(cè)甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法，所述甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)如式I和式II所示，其中，R₁、R₂分別獨(dú)立地選自C_1-20的烷基，R3選自H、Ac(乙酰基)、Tf(三氟甲磺酰基)、Bz(苯甲酰基)、Ms(甲璜酰基)、Ts(對(duì)甲苯璜酰基)或C1-20的烷基，該方法包括：將A環(huán)雙鍵異構(gòu)體樣品溶解并加入衍生劑，反應(yīng)結(jié)束后揮干溶劑，將反應(yīng)產(chǎn)物用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)；

上述衍生檢測(cè)甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法，所述衍生劑可以為間氯過(guò)氧苯甲酸或N-溴代丁二酰亞胺。本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例采用間氯過(guò)氧苯甲酸為衍生劑。

進(jìn)一步地，上述衍生檢測(cè)甾體化合物A環(huán)雙鍵異構(gòu)體的高效液相色譜方法，所述R₁、R₂分別獨(dú)立地選自C_1-10的烷基，R₃選自H或C_1-10的烷基；優(yōu)選R₁、R₂分別獨(dú)立地選自C_1-3的烷基，R₃為H或C_1-3的烷基；更優(yōu)選R₁、R₂為甲基，R₃為H。