[發(fā)明專利]一種多肽疫苗的篩選評估方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710363857.3
• 申請日: 2017-05-22
• 公開（公告）號: CN107247132B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉倩;陸小梅;彭琪;蔣再學(xué);謝明玉
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞市兒童醫(yī)院;東莞市兒科研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C07K14/085;C07K1/22
• 代理公司: 東莞市華南專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44215
• 代理人: 姜華

本發(fā)明涉及多肽疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多肽疫苗的篩選評估方法，包括如下步驟：選擇病原體中和抗原表位多肽序列作為多肽疫苗的序列；將選定的中和抗原表位采用化學(xué)方法進行多肽合成，封閉活性基團；將多肽與偶聯(lián)載體進行偶聯(lián)，洗脫未偶聯(lián)的多肽，封閉未偶聯(lián)的偶聯(lián)載體，清洗待用；將偶聯(lián)多肽后的偶聯(lián)載體裝填至蛋白質(zhì)純化柱，加入抗體樣本，洗脫并收集中和抗體；通過體外微量中和試驗的方法，分析捕獲的中和抗體的中和滴度。本發(fā)明涉及一種前期已在動物試驗中證實具有中和效果的抗原表位肽，評估其是否適合用于人體的多肽疫苗的篩選評估方法。本發(fā)明的篩選評估方法將大大提高多肽疫苗的研發(fā)效率，降低研發(fā)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽疫苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多肽疫苗的篩選評估方法。

背景技術(shù)

多肽疫苗的研發(fā)是目前病毒疫苗研發(fā)中的一個重要組成部分，在疫苗的研究中，多肽疫苗具有免疫應(yīng)答能力、安全、反應(yīng)原性低等優(yōu)勢，是新一代疫苗研究的熱點之一。

EV71病毒是導(dǎo)致重癥手足口病的重要病毒之一，目前多以小鼠和兔等實驗動物進行EV71中和抗原表位肽的研究。然而，由于動物與人的免疫系統(tǒng)的差異，基于動物實驗的EV71中和表位和多肽疫苗的研究，其結(jié)果不能等同于人類對于相同多肽疫苗的反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種多肽疫苗的篩選評估方法，用于篩選經(jīng)動物實驗驗證的具有中和效果的中和抗原表位或多肽在用于人體前的評估工作。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：一種多肽疫苗的篩選評估方法，包括如下步驟：

（1）多肽序列的選擇：選擇病原體中和抗原表位多肽序列作為多肽疫苗的序列；

（2）中和抗原表位多肽的合成：將選定的中和抗原表位進行多肽合成，封閉活性基團；

（3）多肽與偶聯(lián)載體偶聯(lián)：將多肽與偶聯(lián)載體進行偶聯(lián)，洗脫未偶聯(lián)的多肽，封閉未偶聯(lián)的偶聯(lián)載體，清洗待用；

（4）親和層析：將偶聯(lián)多肽后的偶聯(lián)載體裝填至蛋白質(zhì)純化柱，加入抗體樣本，洗脫并收集中和抗體；

（5）中和抗體分析：通過體外微量中和試驗的方法，分析捕獲的中和抗體的中和滴度。

本發(fā)明通過對EV71病毒中和抗原表位SP55、SP70和VP2-28分別通過小鼠和兔作為實驗動物進行研究，具有較好的中和效果。將其作為EV71多肽疫苗的備選序列。

SP55：PESRESLAWQTATNPC

SP70：YPTFGEHKQEKDLEYC

VP2-28：AGGTGTEDSHPPYKQ。

本發(fā)明的實驗動物不僅限于小鼠和兔體內(nèi)驗證有效的中和抗原表位，還包括其他動物，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下任何顯而易見的替換均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

優(yōu)選的，所述步驟（1）具體為：選擇EV71病毒C4流行株中和抗原表位SP55、SP70和VP2-28多肽序列作為多肽疫苗的序列。本發(fā)明選用的病原體不僅限于EV71病毒，還可以為其他病原體（如病毒、細菌、支原體、衣原體和寄生蟲等），還包括臨床各類疾病等的疫苗研發(fā)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下任何顯而易見的替換均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

更為優(yōu)選的，所述步驟（1）中，EV71病毒C4流行株中和抗原表位SP55、SP70和VP2-28多肽序列分別為：

SP55：PDSRESLAWQTATNP

SP70：YPTFGEHKQEKDLEY

VP2-28：AGGTGTEDTHPPYKQ。