[發明專利]一種檢測核酸外切酶I的熒光傳感方法

有效

• 申請號: 201710363009.2
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107192697B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 胡宇芳;張青青;杜春暖;王嬌;饒家佳;郭智勇;葛國平;王邃
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測核酸外切酶I-Exo I的熒光傳感方法，具體步驟如下：

(1)將85～95μL濃度為3～4μM陽離子共軛聚合物CCP與0.5～2μL濃度為0.5～2mM銥配合物混合，然后加入相應體積的10×Exo I緩沖液，得到100μL用于檢測Exo I的基于陽離子共軛聚合物CCP與銥配合物熒光共振能量轉移FRET效應的熒光傳感器體系；檢測熒光強度，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值；

(2)加入1～3μL 5～15μM的ssDNA到步驟(1)中的體系，檢測熒光強度的變化，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值；

(3)不同濃度的Exo I加入到步驟(2)中，然后相應體積的10×Exo I緩沖液，30～40℃下溫育25～35min，檢測熒光強度的變化，計算CCP在415nm的熒光強度與銥配合物在530nm的熒光強度比值，獲得一系列不同濃度的Exo I對應的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅，建立熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅與Exo I濃度之間的定量關系；根據這個定量關系可以檢測樣品中Exo I的活性。

2.根據權利要求1中所述的熒光傳感方法，其特征在于：狹縫寬度為：10nm，激發波長是380nm，掃描電壓是700V，檢測CCP/ssDNA/銥配合物體系中CCP在415nm的熒光強度I₄₁₅與銥配合物在530nm的熒光強度比值I₅₃₀/I₄₁₅對不同濃度Exo I的定量關系。