[發(fā)明專利]一種人白細(xì)胞介素10-Fc融合蛋白及其編碼基因與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710362078.1
• 申請(qǐng)日: 2017-05-22
• 公開（公告）號(hào): CN108948207B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州博虎生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;A61K38/20;A61P31/12;A61P29/00;A61P37/02;A61P35/00
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 徐關(guān)壽

本發(fā)明涉及基因工程藥物領(lǐng)域，具體涉及一種人白細(xì)胞介素10?Fc融合蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。通過對(duì)IgG4Fc部分中多個(gè)位置氨基酸的替換，使得改造后的IL10?Fc融合蛋白具有比現(xiàn)有Fc融合蛋白更優(yōu)越的性能，例如增加體內(nèi)穩(wěn)定性、消除不必要的效應(yīng)子功能以及降低該融合蛋白在生物體內(nèi)的免疫原性。本發(fā)明還公開了所述IL10?Fc融合蛋白藥物用于治療疾病的方法，該方法包括對(duì)患疾病的個(gè)體施用治療有效量的藥物，所述的疾病包括炎性病狀、免疫相關(guān)病癥、纖維化病癥和癌癥等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程藥物領(lǐng)域，具體涉及一種人白細(xì)胞介素10-Fc融合蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。

背景技術(shù)

白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10，IL-10)是于1991年被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，可以調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥及免疫反應(yīng)。起初報(bào)道該細(xì)胞因子能抑制細(xì)胞因子分泌、抗原提呈和CD4+細(xì)胞活化，IL-10可通過抑制活化的單核細(xì)胞和活化的巨噬細(xì)胞的IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、GM-CSF和G-CSF的表達(dá)來抑制免疫應(yīng)答，并且其還抑制NK細(xì)胞的IFN-γ產(chǎn)生。雖然IL-10主要在巨噬細(xì)胞中表達(dá)，但也已在活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、肥大細(xì)胞和單核細(xì)胞中檢測(cè)到表達(dá)。除了抑制免疫應(yīng)答以外，IL-10還展現(xiàn)免疫刺激性質(zhì)，包括刺激IL-2和IL-4處理的胸腺細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)B細(xì)胞的活力，和刺激MHCII類的表達(dá)。

然而，最新的臨床研究顯示聚乙二醇修飾的IL-10事實(shí)上可強(qiáng)有力地激活人體免疫系統(tǒng)功能，尤其是能激活具有殺滅癌細(xì)胞作用的CD8+T細(xì)胞。IL-10能共刺激B細(xì)胞激活、延長(zhǎng)B細(xì)胞存活、及幫助B細(xì)胞中的類別轉(zhuǎn)換。此外，它能共刺激天然殺傷(NK)細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子生成且起生長(zhǎng)因子的作用刺激某些CD8+T細(xì)胞子集增殖(Mosser,D.M.Yhang,X.,Immunological Reviews 226,205-218(2008)，高劑量的IL-10(分別為20和25μg/kg)在人中能引起INFγ生成升高(Lauw,F.N.et al.,J.Immunol.165,2783-2789(2000)；Tilg,H.etal.,Gut50,191-195(2002))。

人IL-10是同型二聚體并且每一個(gè)單體包含178個(gè)氨基酸，其前18個(gè)氨基酸包含信號(hào)肽。本公開的特定實(shí)施方案包含缺乏信號(hào)肽的成熟人IL-10多肽(參見美國(guó)專利第6,217,857號(hào))。成熟的IL-10有160個(gè)氨基酸殘基(Seq ID No.1)，單體分子量為18.7KD，含有4個(gè)半胱氨酸形成的二硫鍵(12-108，62-114)，其天然活性形式是由非共價(jià)鍵連接的分子量為38KD的同源寡二聚體，其在兩個(gè)單體亞單位之間的非共價(jià)相互作用受到破壞后變得無生物活性。獲自IL-10的公開晶體結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)表明功能二聚體展現(xiàn)與IFN-γ的一定相似性(Zdanov等，1995，Structure(Lond)，3:591-601)。作為其多效性活性的結(jié)果，IL-10已與眾多種疾病、病癥和病狀，包括炎性病狀、免疫相關(guān)病癥、纖維化病癥和癌癥關(guān)聯(lián)。

重組人IL-10在體內(nèi)的半衰期僅僅2-3h，蛋白很快被清除，這限制了IL-10的生物利用度(Braat,H.et al.,Expert Opin.Biol.Ther.3(5),725-731(2003))。為了改進(jìn)循環(huán)時(shí)間、暴露、功效及降低腎攝取，已有文獻(xiàn)公開可采用PEG化修飾方法延長(zhǎng)其體內(nèi)半衰期(Mattos,A.et al.,J.Control Release 162,84-91(2012)；Mumm,J.B.et al.,CancerCell 20(6),781-796(2011)；Alvarez,H.M.et al.,Drug Metab.Dispos.，40(2),360-373(2012)；CN 201480024021.5等)。但是，由于PEG修飾位點(diǎn)有多個(gè)，因此采用PEG化修飾后的產(chǎn)物是不均一的，這給后續(xù)的藥物質(zhì)量控制帶來麻煩。