[發明專利]一種蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法和應用

在審

• 申請號: 201710360080.5
• 申請日: 2017-05-20
• 公開（公告）號: CN107118003A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發明（設計）人: 沈中奇;李盈
• 申請（專利權）人: 天津市東方中濱農業科技有限公司
• 主分類號: C05G1/00
• 分類號: C05G1/00;A01G1/04
• 代理公司: 天津市尚文知識產權代理有限公司12222
• 代理人: 李寧

技術領域

本發明涉及應用生物技術原理人工培育真菌的技術領域，具體涉及蛹蟲草的培育，更具體地涉及一種蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法和應用。

背景技術

蛹蟲草（Cordyceps militaris）隸屬于真菌界（Fungi）、子囊菌門（Ascomycota）、子囊菌綱（Ascomycetes）、糞殼菌亞綱（Sordariomycetidae）、肉座菌目（Hypocreales）、麥角菌科（Clavicipitaceae）、蟲草屬（Cordyceps）。蛹蟲草是非常著名的藥食兩用的子囊真菌，也是獲得蟲草素的主要來源，具有很高的開發利用價值。因野生的蟲草十分稀少，資源極缺，為滿足市場需求，正積極推進蟲草的人工培育，而且人工培育的蟲草有效成分接近野生，部分含量甚至高于野生幾倍或者幾十倍。

在目前的相關技術中，通常都是試管種轉接到液體培養液中，再以20℃以下200轉/分鐘發酵培養7天，即可得到液體生產種。但是，在這個搖床培養的過程中不能給液體菌種定時補充氧氣，且液體菌種只能填充搖瓶容積的30%以下，存在搖制時間長、污染率高、發菌時間慢、菌種濃度低和生產效率不高等問題。

發明內容

本發明提供一種蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法，包括以下步驟：

1）將蛹蟲草的純菌種接種到液體培養液中，搖床培養得到萌發初期的液體菌種；

2）將搖床得到的液體菌種轉接到發酵培養液中，通入無菌空氣發酵培養得到發酵菌種。

本發明提供的蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法，獲得的菌種活力高，菌球繁殖速度快，污染率低，從而提高了蛹蟲草子實體的生產效率和產量。

進一步，所述步驟1）中的純菌種通過孢子彈射或組織分離后得到。

進一步，所述步驟1）中的液體培養液按照重量份數計，包括：馬鈴薯9-10份，葡萄糖0.8-1份，蛋白胨0.4-0.5份，酵母浸粉0.4-0.5份，磷酸二氫鉀0.09-0.1份，硫酸鎂0.04-0.05份，脫脂蠶蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，維生素B1 0.0009-0.001份。

進一步，所述步驟1）中的液體培養液按照重量份數計，包括：馬鈴薯9.5份，葡萄糖0.9份，蛋白胨0.45份，酵母浸粉0.45份，磷酸二氫鉀0.093份，硫酸鎂0.047份，脫脂蠶蛹粉0.094份，水54份，維生素B1 0.00095份。

進一步，所述步驟2）中的發酵培養液按照重量份數計，包括：馬鈴薯4.6-5份，葡萄糖0.9-1份，蛋白胨0.25-0.3份，磷酸二氫鉀0.09-0.1份，硫酸鎂0.09-0.1份，脫脂蠶蛹粉0.09-0.1份，水50-60份，維生素B1 0.0009-0.001份。

進一步，所述步驟2）中的發酵培養液按照重量份數計，包括：馬鈴薯4.8份，葡萄糖1份，蛋白胨0.25份，磷酸二氫鉀0.1份，硫酸鎂0.1份，脫脂蠶蛹粉0.1份，水50份，維生素B1 0.001份。

進一步，所述蛋白胨中總氮含量不低于13.5%，氨基酸含量不低于3%。

進一步，所述步驟1）中，以200r/min搖床培養2-3天，培養溫度為20-23℃。

進一步，所述步驟2）中，通入無菌空氣培養5天，培養溫度為20-21℃。

進一步，所述步驟2）中，在避光的環境下發酵培養。

進一步，制備培養液所使用的水為礦泉水或蒸餾水，PH值為6-7。

本發明蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法可廣泛用于蛹蟲草的培育中，從而提高蛹蟲草子實體的生產效率和產量。

本發明提供一種培育蛹蟲草的方法，包括：將上述蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法制備的發酵菌種轉接至子實體培養基，繼續進行培養。

進一步，將上述蛹蟲草液體發酵菌種的培育方法制備的發酵菌種轉接至固體培養基，放置到暗培室避光培養得到菌絲體，將菌絲體轉色，進行子實體培養。

本發明采用搖床培養與發酵罐發酵培養相結合的方式，解決了背景技術存在的問題。并且，使用的培養液可提供最合適的碳氮比，營養更全面，使蟲草在發菌過程中發菌快、穩定，減少菌種的退化，增強抵抗力。與采用傳統發菌方法和配方的培養液相比，本發明雜菌污染率降低了15%，后期蛹蟲草產量增加了10%-15%。

具體實施方式