[發明專利]一種快速鑒別重樓品種的試劑盒

有效

• 申請號: 201710357874.6
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN106929600B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 尹鴻翔;唐卓;尹顯梅;陳蓉
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 張娟;劉華玲

1.一種快速鑒別華重樓、黑籽重樓、球藥隔重樓及其混偽品的試劑盒，其特征在于：它包含1～3對引物，引物對選自：SEQ ID NO：1～2所示的引物對1，SEQ ID NO：3～4所示的引物對2，SEQ ID NO：5～6所示的引物對3；

所述混偽品為長藥隔重樓、多葉重樓、五指蓮、平伐重樓、狹葉重樓、毛重樓和/或南重樓。

2.一種快速鑒別華重樓、黑籽重樓、球藥隔重樓及其混偽品的方法，其特征在于，步驟如下：

a、提取樣本DNA：提取待檢樣本的DNA；

b、基因擴增：用權利要求1所述的試劑盒對待檢樣本的DNA進行PCR擴增；

c、結果檢測：對DNA擴增結果進行檢測；

所述混偽品為長藥隔重樓、多葉重樓、五指蓮、平伐重樓、狹葉重樓、毛重樓和/或南重樓；

步驟b中，所述PCR擴增的條件為：

95℃預變性30s；

94℃變性30s，64～66℃退火30s，72℃延伸20s；27～29個循環；

72℃延伸1 min；

步驟b中，所述PCR擴增的體系為：

總體積為25μl時：

10×Taq buffer 2.5ul，dNTP 0.5ul，模板30～50ng，

SEQ ID NO：1～6引物的用量分別為1μM、1μM、0.5μM、0.5μM、75nM、50nM，其余為ddH2O。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述退火的溫度為66℃，循環的次數為28次。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟b中所述PCR擴增的體系中，模板用量為30ng。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟c中，所述檢測采用的方法為凝膠電泳。

6.權利要求1所述的試劑盒在鑒別華重樓、黑籽重樓、球藥隔重樓及其混偽品中的用途；

其中，所述混偽品為長藥隔重樓、多葉重樓、五指蓮、平伐重樓、狹葉重樓、毛重樓、南重樓。