[發(fā)明專利]一種快速鑒別重樓品種的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710357874.6
• 申請(qǐng)日: 2017-05-19
• 公開（公告）號(hào): CN106929600B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹鴻翔;唐卓;尹顯梅;陳蓉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 張娟;劉華玲

本發(fā)明提供了一種快速鑒別重樓品種的試劑盒，它包含1～3對(duì)引物，引物對(duì)選自：SEQ ID NO：1～2所示的引物對(duì)1，SEQ ID NO：3～4所示的引物對(duì)2，SEQ ID NO：5～6所示的引物對(duì)3。本發(fā)明還提供了所述試劑盒的用途及一種快速鑒別重樓品種的方法。本發(fā)明提供的試劑盒和方法，可以準(zhǔn)確、有效的鑒別華重樓，球藥隔重樓，黑籽重樓、長藥隔重樓與其他重樓易混種，實(shí)現(xiàn)了在單個(gè)反應(yīng)管中一次性檢測多個(gè)靶標(biāo)的目的，而且操作簡單，高效快速，成本低，應(yīng)用前景良好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速鑒別重樓品種的試劑盒及鑒別方法。

背景技術(shù)

重樓Paris L.為百合科(Liliaceae)多年生草本植物，《中國植物志》英文版中記載重樓屬植物全世界約有40多個(gè)種及變種，主要分布在亞歐大陸的熱帶及溫帶地區(qū)，我國有22個(gè)種，主要分布在云南、貴州、四川等西南地區(qū)。重樓屬植物經(jīng)濟(jì)價(jià)值顯著，在我國民間具有悠久的藥用歷史，最早以“蚤休”之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，“治驚風(fēng)，搖頭弄舌，熱氣在腹中，癲疾，癰瘡陰蝕，下三蟲，去毒蛇”，其基源為重樓屬多種植物。

重樓作為多基源藥材，藥用重樓的基源一直比較混亂，由于重樓屬不同種植物的根莖形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)極近似，各品種特征性狀交叉重疊，界限模糊不清，給重樓藥用植物鑒定帶來困難。鑒于重樓屬不同種在藥用成分甾體皂甙的種類、含量等方面存在顯著的差異，療效也有很大差異，不同品種的重樓混用將給中醫(yī)產(chǎn)業(yè)的質(zhì)量控制帶來極大隱患。

四川地區(qū)分布的重樓品種也正是如此，其中，華重樓(Paris polyphylla SmithVar.chinensis(Franch).Hara)是四川省的廣布種，并被收載于2015年版中國藥典作為重樓藥材的正品基源植物之一，另外，球藥隔重樓(Paris fargesii)和黑籽重樓(P.thibetica)也被認(rèn)為有顯著的藥用價(jià)值而被收載與2014版《四川省藏藥材標(biāo)準(zhǔn)》。但考察發(fā)現(xiàn)，作為重樓藥材的人工栽培品種還包括多葉重樓(P.polyphyllavar.polyphylla)、五指蓮(P.axialis)、平伐重樓(P.vaniotii)，狹葉重樓(P.mairei)、毛重樓(P.mairei)、長藥隔重樓(P.polyphylla var.pseudothibetia)等混雜栽培種，品種十分混亂。因此，對(duì)重樓植物進(jìn)行準(zhǔn)確快速的鑒定迫在眉睫。

由于遺傳基因具有相對(duì)穩(wěn)定性，不宜受到環(huán)境的影響發(fā)生改變，且不受植物生長時(shí)期，生長部位的影響，因此近年來廣泛使用分子生物學(xué)手段進(jìn)行中藥材鑒定。已有的報(bào)道中，研究者們均是通過DNA條形碼序列對(duì)重樓屬品種進(jìn)行鑒定(見朱英杰，方海南重樓屬DNA條形碼篩選與鑒定方法的研究[D].西南交通大學(xué).2010；姜藜等，基于ITS全序列分析的重樓常見混偽品鑒定研究[J].中國新藥雜志,2013,22(20):2439～2444；方海蘭等，基于DNA條形碼的中藥材種子種苗鑒定研究-以重樓為例[J].中藥材材,2016,35(5):986～990)，需要在PCR反應(yīng)后進(jìn)行產(chǎn)物回收測序等步驟，不僅操作繁瑣費(fèi)時(shí)，而且測序成本高，不利于推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速鑒別重樓品種的試劑盒及其鑒別方法。

本發(fā)明提供了一種鑒別重樓品種的試劑盒，它包含1-3對(duì)引物，引物對(duì)選自：SEQID NO：1～2所示的引物對(duì)1，SEQ ID NO：3～4所示的引物對(duì)2，SEQ ID NO：5～6所示的引物對(duì)3。

H-F(SEQ ID NO：1)：GCGCCCGATGTCATTCGA

H-R(SEQ ID NO：2)：TTTCAACCCACAGGCGTAGTCC

QYG-F(SEQ ID NO：3)：GGAACGAGTATGTGAATGTGACCCAT

QYG-R(SEQ ID NO：4)：CTACGTTCTTCATCGATACGGGTT