[發明專利]一種用于檢測德爾卑沙門氏菌的靶基因、特異性引物對及檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201710354984.7
• 申請日: 2017-05-19
• 公開（公告）號: CN107164472B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 翟立公;王俊穎;王蓓蓓;王麗;郭元新;楊劍婷;杜傳來
• 申請（專利權）人: 安徽科技學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 合肥匯融專利代理有限公司 34141
• 代理人: 張雁

本發明提供一種用于檢測德爾卑沙門氏菌的靶基因、特異性引物對及檢測方法和試劑盒。本發明特異性引物對是根據5個德爾卑沙門氏菌特異性檢測靶點設計而成，檢測靶點穩定高、特異性強，本發明提供的檢測方法包括：提取樣品DNA，PCR擴增；凝膠電泳檢測擴增產物；比較電泳后條帶。通過實驗比較分析，本發明方法具有單一性強，檢測結果可靠，結果判定簡單的特點，可以廣泛應用于食品衛生領域。

技術領域

本發明涉及分子生物學及生物檢測技術領域，涉及一種用于檢測德爾卑沙門氏菌的靶基因、特異性引物對及檢測方法和試劑盒。

背景技術

德爾卑沙門氏菌(Salmonella Derby)是引起人類感染的主要沙門氏菌血清型之一，此血清型菌株的主要宿主為人類。德爾卑沙門氏菌可存活在畜禽體內，一旦畜禽的糞便或攜帶此病菌的生肉污染了食品及加工場所，在溫度適宜的環境下，此菌就會迅速的生長繁殖，當菌數在食品中達到一定數量，被食用后就會造成食物中毒，危害人的身心健康，嚴重者甚至危及生命。鄭華英、周敦金等在2003年《一起德爾卑沙門氏菌污染水源引起的腸道傳染病暴發流行的調查》中顯示，武漢市一個村莊因為飲用了未經消毒的井水后，陸續出現了上吐下瀉、腹痛發熱等癥狀，隨后檢驗人員進行了取樣檢驗分析，發現該次事故是由于德爾卑沙門氏菌感染而引起。謝春平等在2013年《合肥地區五類食品沙門氏菌污染情況調查分析》中發現，合肥地區常見五類食品 (生肉、水產品、鹵菜、乳制品、發酵豆制品)的沙門氏菌污染調查表明，在以上食品中共檢測出沙門氏菌22株，其中德爾卑沙門菌占到 45.6％。國家質量監督檢驗檢疫總局的2002年第25和26號令中明確規定沙門氏菌為必檢項目。目前，隨著分子生物學的不斷發展尤其是聚合酶鏈式反應(PCR)的發展，通過分子技術檢測鑒定沙門氏菌血清型變得更加可靠。

現有技術中，德爾卑沙門氏菌檢測主要使用傳統的培養方法，整個檢測過程步驟較多，時間較長，一般需要4-6個工作日，而且干擾的因素較多，檢測結果的判定較復雜，給食品檢測帶來非常不利的影響。而且用于德爾卑沙門氏菌的PCR檢測的靶基因研究較少且主要是由于沒有合適的檢測靶點。

發明內容

針對現有技術不足，本發明提供一種用于檢測德爾卑沙門氏菌的靶基因、特異性引物對及檢測方法和試劑盒，解決了現有技術中德爾卑沙門氏菌檢測結果判定復雜、檢測周期長的技術問題。

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

一種用于檢測德爾卑沙門氏菌的靶基因，RU61_00441、 RU61_00445、RU61_00447、RU61_RS09205、RU61_RS06985， RU61_00441具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或其特異性片段， RU61_00445具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或其特異性片段， RU61_00447具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列或其特異性片段， RU61_RS09205具有如SEQID NO.4所示的核苷酸序列或其特異性片段，RU61_RS06985具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列或其特異性片段。

用于擴增所述靶基因的特異性引物對，所述特異性引物對分別為： SD1、SD2、SD3、SD11和SD12，其中，

SD1-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示、SD1-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.7所示；

SD2-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示、SD2-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.9所示；

SD3-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示、SD3-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.11所示；

SD11-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示、SD3-11：核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；