[發(fā)明專利]采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710354046.7
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107091892A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 佟芳荻;張婷;蔣思平;張煒
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞市中鼎檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 深圳市智圈知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)44351
• 代理人: 韓紹君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品的檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其中的合成著色劑包括檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅。

背景技術(shù)

合成著色劑是人工合成的使食品著色和改善食品色澤的物質(zhì)，具有色澤鮮艷、性質(zhì)穩(wěn)定、使用成本低等優(yōu)點，但具有一定毒性，長期大量使用會對人體造成損害。目前，我國已批準(zhǔn)使用的合成著色劑有22種，常用合成著色劑有檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅等，GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定了使用原則、使用范圍和最大使用量。

現(xiàn)有檢測合成著色劑的方法有兩種，一種是通過聚酰胺吸附法萃取出樣品中的色素，另一種是通過液-液分配法萃取。兩者都不能同時萃取常用的多種合成著色劑，且難以排除雜質(zhì)干擾。固體樣品前處理過程中，用水直接提取難以將合成著色劑全部提取出來，造成回收率低，測試結(jié)果不準(zhǔn)確。

本發(fā)明旨在提供一種采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，本發(fā)明采用弱陰離子交換萃取柱，可以在酸性環(huán)境下通過其攜帶的哌嗪基團特定的吸附合成著色劑(檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅)中的苯磺酸基團，可以同步萃取8種合成著色劑，提高萃取效果的同時排除雜質(zhì)干擾。在固體樣品的前處理階段，采用氨水、無水乙醇、水混合溶液可以更快更完全的將合成著色劑提取出來。同時，本發(fā)明通過優(yōu)化HPLC及DAD檢測器的參數(shù)并在各合成著色劑保留時間內(nèi)檢測其特征吸收光譜所對應(yīng)的色譜峰峰面積可以進一步排除干擾，并獲得更低的檢出限。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，本發(fā)明采用混合型弱陰離子交換萃取柱，可以在酸性環(huán)境下通過自身攜帶的哌嗪基團特定的吸附合成著色劑(檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅)中的苯磺酸基團，同步萃取8種合成著色劑，提高萃取效果的同時排除雜質(zhì)干擾。在固體樣品的前處理階段，采用提取劑可以更快更完全的將合成著色劑提取出來。同時，本發(fā)明通過優(yōu)化HPLC及DAD檢測器的參數(shù)并在各合成著色劑的保留時間內(nèi)檢測其特征吸收波長所對應(yīng)的色譜峰峰面積，可以進一步排除干擾，并獲得更低的檢出限。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，包括以下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的制備：分別稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅，并將其一起轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加水和甲醇的混合溶液定容至刻度，得到標(biāo)準(zhǔn)混合溶液；經(jīng)逐級稀釋后得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

2)待測液的制備：液體樣品加水稀釋，再加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3-4，得到待固相萃取柱凈化的待測液；固體樣品加入氨水、無水乙醇和水的混合溶液，經(jīng)兩次重復(fù)提取后，將得到的上清液合并，氮吹除去上清液中的氨水和乙醇，加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3-4，得到待固相萃取柱凈化的待測液。

3)待測液凈化：采用混合型弱陰離子交換固相萃取柱，并對該萃取柱進行活化和平衡，然后將待測液上樣、淋洗和洗脫，此為合成著色劑的萃取過程，將洗脫液氮吹至近干，轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，過濾，得到凈化后的待測液；

4)檢測：用帶有DAD檢測器的高效液相色譜儀對混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液和凈化后的待測液進行測試，采用梯度洗脫，并在變波長下進行檢測，其中，高效液相色譜儀的流動相為乙酸銨溶液與甲醇梯度混合的混合液。以混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，8種合成著色劑對應(yīng)的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定待測液的色譜峰的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中8種合成著色劑的質(zhì)量濃度。采用DAD檢測器靈敏度高、噪音低、線性范圍寬，適用于梯度洗脫，而且可得到任意吸收波長對應(yīng)的色譜圖。采用高效液相色譜及DAD檢測器檢測，優(yōu)化了色譜條件和流動相配比，根據(jù)各合成著色劑保留時間選擇其特征吸收波長所對應(yīng)的色譜峰檢測，得到更低的檢出限同時排除雜質(zhì)組分的干擾。

作為本發(fā)明采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法的一種改進，步驟1)中水和甲醇的體積比為(0.5-2):1，其可以使8種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)完全溶解。