[發明專利]采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法

在審

• 申請號: 201710354046.7
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107091892A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 佟芳荻;張婷;蔣思平;張煒
• 申請（專利權）人: 東莞市中鼎檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 深圳市智圈知識產權代理事務所(普通合伙)44351
• 代理人: 韓紹君

1.一種采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)標準系列工作溶液的制備：分別稱取標準物質檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、赤蘚紅，并將其一起轉移至容量瓶中，加水和甲醇的混合溶液定容至刻度，得到標準混合溶液；經逐級稀釋后得到混合標準系列工作溶液；

2)待測液的制備：液體樣品加水稀釋，再加入檸檬酸溶液調節pH值至3-4，得到待固相萃取柱凈化的待測液；固體樣品加入氨水、無水乙醇和水的混合溶液，經兩次重復提取后，將得到的上清液合并，氮吹除去其中氨水和乙醇，加入檸檬酸溶液調節pH值至3-4，得到待固相萃取柱凈化的待測液；

3)待測液凈化：采用DiKMAProElut PWA混合型弱陰離子交換固相萃取柱，并對該萃取柱進行活化和平衡，然后將待測液上樣，經淋洗和洗脫后，將洗脫液氮吹至近干，再轉移至容量瓶中定容，過濾，得到凈化后的待測液；

4)檢測：用帶有DAD檢測器的高效液相色譜儀對混合標準系列工作溶液和凈化后的待測液進行測試，采用梯度洗脫，并在變波長下進行檢測，其中，高效液相色譜儀的流動相為乙酸銨溶液與甲醇梯度混合的混合液；以混合標準系列工作溶液的濃度為橫坐標，8種合成著色劑對應的色譜峰的峰面積為縱坐標繪制標準曲線；測定待測液的色譜峰的峰面積，根據標準曲線得到待測液中8種合成著色劑的質量濃度。

2.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，步驟1)中水和甲醇的體積比為(0.5-2):1。

3.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，步驟2)中檸檬酸溶液的質量濃度為10％-30％。

4.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，若樣品為固體樣品，則步驟2)具體為：將稱取的樣品加入離心管中，并向離心管中加入氨水、無水乙醇、水的混合溶液，其中氨水、無水乙醇、水的體積比為(1.5-3):(6-8.5):1，渦旋混勻，超聲提取，離心后將上清液過濾，重復兩次提取后合并上清液，氮吹除去上清液中的氨水和乙醇，再加入檸檬酸溶液調節pH值至3-4，得到待固相萃取柱凈化的待測液。

5.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，步驟3)中，活化所使用的溶劑為甲醇，平衡所用的溶劑為去離子水，淋洗所用的溶劑為體積比分別為1：(0.5-2)：(2-5)的甲醇、甲酸和水的混合溶劑，洗脫所用的溶劑為體積比分別為(1-3)：(5-9)：1的氨水、無水乙醇和水的混合溶劑。

6.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于：步驟3)中上樣時待測液的流速不超過1滴/s。

7.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，步驟3)中，定容所用的溶劑為體積比為(0.5-2)：1的甲醇和水的混合溶劑，過濾是將定容后的溶液通過直徑為0.22μm的聚四氟乙烯濾膜過濾到樣品瓶中。

8.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，高效液相色譜儀的色譜柱為C18柱，250mm×4.6mm，色譜柱內的填料的粒徑為5μm。

9.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，梯度洗脫的程序如下表：

梯度洗脫時的柱溫為35℃，混合液的流速為1.0mL/min，乙酸銨溶液的濃度為0.02mol/L。

10.根據權利要求1所述的采用高效液相色譜法測試食品中合成著色劑的含量的方法，其特征在于，變波長的程序如下表：