[發(fā)明專利]黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性成分的篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710352386.6
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107325147A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 代現(xiàn)平;李孟順;耿楓;班翠紅
• 申請（專利權(quán)）人: 濱州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;C07D311/30;C07D311/32;C07D311/40;C07H1/08;C07H17/07;C07C51/42;C07C59/48
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11531
• 代理人: 李宏偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于黃褐毛忍冬化學(xué)成分研究技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性成分的篩選方法。

背景技術(shù)

中草藥是人類文明的瑰寶，在人類醫(yī)學(xué)史上發(fā)揮著不可替代的作用。由于具有無污染，無公害，高效低毒的特點，為世人所青睞。大量實驗表明中草藥對治療高血壓等心血管疾病有著很好的效果。降血壓有效的中藥材很多，如鉤藤、葛根、野菊花、夏枯草等，據(jù)統(tǒng)計有100多種。因此從中草藥中篩選ACEI意義重大，不僅可以為開發(fā)新型的ACEI類降壓藥物做一些前期工作，還可以從抑制ACE活性的角度探討中草藥的降壓機理。自從1965年Ferria等人從南美蝮蛇毒液中首次發(fā)現(xiàn)天然ACEI以來，大量研究發(fā)現(xiàn)ACEI廣泛存在于天然產(chǎn)物中。天然ACEI與合成ACEI相比具有以下優(yōu)點：(1)安全性高。由于是以食品和溫和的天然藥物為原料，因此不會對人體造成傷害。(2)降壓效果溫和、專一、持久。天然ACEl只會對高血壓患者有降壓效果，對正常人血壓沒有影響。(3)無副作用。目前臨床降壓類藥物多有副作用，而還未見天然ACEI副作用的報道。從天然資源中尋找ACEI，已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的重要課題。

目前從天然資源中得到的ACEI主要有三大類，源于食物蛋白的肽類物質(zhì)、有機多酚酸及黃烷醇類物質(zhì)和生物堿類物質(zhì)。其中通過酶解ACE降壓肽的報道最為多見，科學(xué)研究者們已經(jīng)從昆蟲、動物、植物、奶制品和海洋生物蛋白的酶解物中發(fā)現(xiàn)了大量具有ACEI活性的短肽。除ACE抑制肽外，有機多酚酸類和黃烷醇類物質(zhì)對ACE的抑制活性報道也較多。如我國20余年前從植物沙棘中提取出的總黃酮化合物-醋柳黃酮，已用于臨床，研究表明可降低內(nèi)皮素，升高NO，抑制ACE的活性和AngⅡ生成而降壓。Actis-Goretta組的實驗結(jié)果表明，富含黃烷醇的物質(zhì)，如紅酒、白酒、茶和巧克力等對ACE的活性具有抑制作用。Ottaviani等人測得花青素的二聚物、四聚物和六聚物對ACE抑制活性的IC50值分別為97.0、4.4和8.2mM。Loizzo等從中藥高樗中發(fā)現(xiàn)了6個具有ACE抑制活性的黃酮化合物。高小平等人從丹參水溶性部分提取出具有ACE抑制活性的丹酚酸B。有關(guān)生物堿類物質(zhì)對ACE抑制作用的報道較少，kang等人發(fā)現(xiàn)貝母提取物對ACE有抑制作用，其中去氫貝母堿、貝母堿和貝母素為活性成分。

忍冬屬是忍冬科的模式屬，全世界約200種，我國有98種，廣布于各省區(qū)。屬內(nèi)有不少藥用植物，如金銀花是有悠久歷史的著名中藥，本屬植物的花蕾作為金銀花中藥材商品的約有18種。由于該屬植物有多種生理活性且分布廣泛，長久以來，忍冬屬植物的化學(xué)成分和生物活性成為研究的熱點之一。

黃褐毛忍冬是忍冬科忍冬屬植物，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，用于臃腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒。

目前，國內(nèi)外對黃褐毛忍冬的化學(xué)成分和藥理活性研究報道較少。我們初步研究發(fā)現(xiàn)，黃褐毛忍冬90％乙醇提取物的氯仿萃取部分對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)顯示較強的抑制活性。進一步實驗表明，黃褐毛忍冬含有黃酮類、三萜類、倍半萜及酚酸類等化學(xué)成分，并從中得到多個單體化合物。為了闡明黃褐毛忍冬的ACEI活性成分，我們對其氯仿提取部位進行系統(tǒng)的提取分離和純化，并利用已有的研究基礎(chǔ)進行活性篩選，以期尋找活性高、毒副作用小的ACEI活性成分。通過本項研究，可進一步開發(fā)利用黃褐毛忍冬植物資源，為新型降壓藥物的研制尋找先導(dǎo)化合物。

發(fā)明內(nèi)容

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性成分的篩選方法，篩選出具有高活性的柏雙黃酮和洋芹素，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性成分的篩選方法，具體按照以下步驟進行：

步驟1、將原材料黃褐毛忍冬粉碎，用乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，得流浸膏；

步驟2、將流浸膏加水稀釋，用氯仿萃取，得到氯仿提取物；

步驟3、氯仿提取物經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(100:1～1:1)梯度洗脫，以硅膠薄層色譜指導(dǎo)合并相同組分，得流分1～17；

步驟4、對上述17組流分，分別進行活性測試；

步驟5、選擇活性好的流分，經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(60:1～8:1)梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜，以氯仿-甲醇(1:1～0:1)為洗脫劑洗脫；

步驟6、經(jīng)上述分離后得到烏蘇酸、柚皮素、洋芹素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、柏雙黃酮和咖啡酸。