[發明專利]黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉化酶活性成分的篩選方法

在審

• 申請號: 201710352386.6
• 申請日: 2017-05-18
• 公開（公告）號: CN107325147A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 代現平;李孟順;耿楓;班翠紅
• 申請（專利權）人: 濱州醫學院
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;C07D311/30;C07D311/32;C07D311/40;C07H1/08;C07H17/07;C07C51/42;C07C59/48
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙)11531
• 代理人: 李宏偉

1.一種黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉化酶活性成分的篩選方法，其特征在于，具體按照以下步驟進行：

步驟1、將原材料黃褐毛忍冬粉碎，用乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙醇至無醇味，得流浸膏；

步驟2、將流浸膏加水稀釋，用氯仿萃取，得到氯仿提取物；

步驟3、氯仿提取物經硅膠柱層析，以氯仿-甲醇(100:1～1:1)梯度洗脫，以硅膠薄層色譜指導合并相同組分，得流分1～17；

步驟4、對上述17組流分，分別進行活性測試；

步驟5、選擇活性好的流分，經硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(60:1～8:1)梯度洗脫，再經Sephadex LH-20凝膠柱色譜，以氯仿-甲醇(1:1～0:1)為洗脫劑洗脫；

步驟6、經上述分離后得到烏蘇酸、柚皮素、洋芹素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、柏雙黃酮和咖啡酸。

2.根據權利要求1所述的黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉化酶活性成分的篩選方法，其特征在于，所述步驟1中，將原材料黃褐毛忍冬粉碎至180-220目。

3.根據權利要求1所述的黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉化酶活性成分的篩選方法，其特征在于，所述步驟1中，用90％濃度的乙醇回流提取3次，第一次用12倍于原材料的乙醇提取2小時，第二次用9倍于原材料的乙醇提取2小時，第三次用7倍于原材料的乙醇提取1.5小時。

4.根據權利要求1所述的黃褐毛忍冬中抗血管緊張素轉化酶活性成分的篩選方法，其特征在于，所述步驟4中，

活性測試測試方法如下：將8-12mM的底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸和ACE于37℃的水浴中反應45min，用1.2M的鹽酸終止反應，接著用氯仿萃取反應生成的馬尿酸，把氯仿蒸干后，溶于水中，再用分光光度計于228nm處測定產品馬尿酸的吸光度值；對于每一個樣品都設立空白對照、陰性對照和陽性對照；假設字母N、S、B分別代表陰性對照的吸光度值、測定樣品的吸光度值、空白對照的吸光度，那么，樣品ACE抑制率％＝100％(N-S)/(N-B)。