[發明專利]禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法在審
| 申請號： | 201710350008.4 | 申請日： | 2017-05-17 |
| 公開（公告）號： | CN107058246A | 公開（公告）日： | 2017-08-18 |
| 發明（設計）人： | 王培坤;林璐璐;楊永立;李海娟;磨美蘭;韋天超;黃騰;韋平 | 申請（專利權）人： | 廣西大學 |
| 主分類號： | C12N7/02 | 分類號： | C12N7/02;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104 | 代理人： | 楊立華 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 白血病病毒 混合 感染 單一 病毒 純化 方法 | ||
1.一種禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于通過測定混合感染病毒的TCID50進行終點稀釋，采用稀釋后的病毒液接種DF-1細胞，收集上清與細胞培養物并用分型鑒定引物與IFA的對其進行鑒定，從而獲得單一亞型的禽白血病病毒。
2.根據權利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于：所述分型鑒定引物包括ALV-A引物對、ALV-B引物對、ALV-J引物對，它們分別具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的堿基序列。
3.根據權利要求2所述的禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于按以下步驟操作進行：
(1)獲得混合感染病毒在DF-1增殖3代，第3代通過接種DF-1細胞，隨后通過檢測ALV-p27抗原并按照Reed-Muench方法測得病毒TCID50；
(2)病毒液以測定TCID50進行終點稀釋，稀釋后病毒液以24孔板復孔作用于單層DF-1細胞2h，隨后換液維持培養至9天；
(3)收集細胞培養物上清并分別編號保存于-80℃，細胞培養物收集抽取DNA并用分型引物鑒定；
(4)鑒定為單一亞型病毒感染的對應孔細胞上清接種DF-1細胞增殖3代進行IFA分型鑒定。
4.根據權利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于步驟(1)所述檢測ALV-p27抗原采用IDEXX ALV-p27試劑盒。
5.根據權利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于步驟(2)所述稀釋采用的稀釋液為Gibco生產DMEM。
6.根據權利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中單一病毒的純化方法，其特征在于步驟(2)所述維持培養采用的培養液為含1％FBS的DMEM。
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