[發明專利]提高DNB雙末端測序質量的方法和DNB雙末端測序方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201710349201.6
• 申請日: 2017-05-17
• 公開（公告）號: CN108070642B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 龔梅花;王靜靜;羅銀鈴;羅宇芬;李長英;陳奧;徐崇鈞;章文蔚
• 申請（專利權）人: 深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 孫銀行;彭家恩

1.一種提高DNB雙末端測序質量的方法，其特征在于，所述方法包括：對DNA納米球進行一鏈合成測序時，使用部分dUTP代替dTTP進行聯合探針錨定聚合測序；在所述一鏈合成測序完成后，使用USER酶消化一鏈上的尿嘧啶，然后使用變性劑洗脫一鏈或使用外切酶消化一鏈。

2.根據權利要求1所述的提高DNB雙末端測序質量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的1％～99％。

3.根據權利要求2所述的提高DNB雙末端測序質量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％～75％。

4.根據權利要求3所述的提高DNB雙末端測序質量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％。

5.根據權利要求1-4任一項所述的提高DNB雙末端測序質量的方法，其特征在于，所述變性劑是甲酰胺。

6.一種DNB雙末端測序方法，其特征在于，所述方法包括：

對DNA納米球進行一鏈合成測序時，先雜交一鏈測序引物，然后在dNTP混合物中引入部分dUTP代替dTTP進行聯合探針錨定聚合測序，使得一鏈部分dTTP位點被dUTP取代；

在所述一鏈合成測序完成后，使用USER酶消化一鏈上的尿嘧啶，產生部分核苷酸缺口，使得一鏈片段化；

然后使用變性劑洗脫一鏈或使用外切酶消化一鏈，并通過檢測信號來確保一鏈完全去除；

最后通過聚合和鏈置換的作用生成二鏈，從而進行雙末端測序。

7.根據權利要求6所述的DNB雙末端測序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的1％～99％。

8.根據權利要求7所述的DNB雙末端測序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％～75％。

9.根據權利要求8所述的DNB雙末端測序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％。

10.根據權利要求6-9任一項所述的DNB雙末端測序方法，其特征在于，所述變性劑是甲酰胺。

11.一種DNB雙末端測序所使用的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：用于制備DNA納米球的試劑成分、一鏈測序引物、至少包括dUTP在內的dNTP、USER酶、聚合酶、變性劑或外切酶中的至少一種，以及說明書，其中所述說明書包括DNB雙末端測序方法；

所述方法包括：對DNA納米球進行一鏈合成測序時，先雜交一鏈測序引物，然后在dNTP混合物中引入部分dUTP代替dTTP進行聯合探針錨定聚合測序，使得一鏈部分dTTP位點被dUTP取代；在所述一鏈合成測序完成后，使用USER酶消化一鏈上的尿嘧啶，產生部分核苷酸缺口，使得一鏈片段化；然后使用變性劑洗脫一鏈或使用外切酶消化一鏈，并通過檢測信號來確保一鏈完全去除；最后通過聚合和鏈置換的作用生成二鏈，從而進行雙末端測序。

12.根據權利要求11所述的DNB雙末端測序所使用的試劑盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的1％～99％。

13.根據權利要求12所述的DNB雙末端測序所使用的試劑盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％～75％。

14.根據權利要求13所述的DNB雙末端測序所使用的試劑盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP總量的50％。