[發明專利]一個早期評估食管癌發病風險的SNP及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201710345378.9
• 申請日: 2017-05-09
• 公開（公告）號: CN107236791B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 白春英;蘇志勇;瑞云;史鐵偉;許麗艷;李恩民;賴青;金品辛;王亞奇;張佳樂;孫斌;王治國
• 申請（專利權）人: 赤峰學院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發明是一個與食管鱗癌發生高度相關的單核苷酸多態性位點的檢測試劑盒。該試劑盒包括針對5?脂氧合酶E254K位點設計的上游等位基因特異性引物2條，下游引物1條，一對內參照引物，PCR mix，滅菌水。本發明所采用的試劑盒能夠快速檢測出與食管鱗癌發生高度相關的5?LO E254K位點，與經典的測序法和酶切法相比具有簡便、經濟、快速等特點，并且本發明所基于的等位基因特異性PCR法是一種成熟可靠、可在基層醫院廣泛使用的方法。

技術領域

本發明涉及人外周血基因組DNA并利用等位基因特異性PCR法去檢測食管癌患者的5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LO)c.760G＞A(E254K)位點情況進而早期評估食管癌發病風險的試劑盒。

背景技術

食道鱗狀細胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma，ESCC)是我國一種常見的上消化道惡性腫瘤，在國人的惡性腫瘤死亡率中位居第四位。上世紀70年代，在全國范圍內實施了惡性腫瘤普查，確立河北磁縣、河南林縣、山西陽泉、四川鹽亭、廣東潮汕和江蘇淮安等地區為中國食管癌六大高發區。內蒙赤峰地區是我國北方食管癌較高發地區。我們的前期流行病學調查結果表明，該地區食管癌發病具有鮮明的蒙古族高發的特點。尤其是蒙古族牧民集中居住的牧區，食管癌的發病率最高，是危害當地蒙古族牧民的最主要惡性腫瘤，男性發病率遠遠高于女性。值得特別注意的是，赤峰地區蒙古族人發生食管癌有明顯家族聚集性，比如我們初步的調查結果顯示，在赤峰翁牛特旗一個牧場的200多戶蒙古族居民中，近十年來發現有20余人患食管癌，情況十分嚴重，其中一個典型的例子是一家兄弟三人均因罹患食管癌死亡。

早期評估食管癌發病風險對于臨床早期診斷和預防具有重要意義。一些食管癌若早期發現是可以完全治愈的，因此，食管癌重在早期診斷。然而，目前除了做X線鋇餐檢查和胃鏡外還沒有一種簡便無創的方法可以早期評估食管癌發病風險。做胃鏡對患者來說比較痛苦，是一種有創性的檢測手段，很多患者因為害怕做胃鏡而錯失早期診斷的機會。對于臨床癥狀尚不明顯的食管癌早期評估來說，需要一種快速簡便且無創的檢測方法來評估食管癌的發病風險，本發明所采用的試劑盒能夠快速檢測出與食管鱗癌高度相關的5-LO E254K位點，與經典的測序法和酶切法相比具有簡便、經濟、快速等特點，與胃鏡法相比對人體無傷害，屬于無創性的早期檢測方法，并且本發明所基于的等位基因特異性PCR法是一種成熟可靠、可在基層醫院廣泛使用的方法。本試劑盒中5-脂氧合酶的背景介紹如下。

花生四烯酸和白三烯等脂類物質代謝異常在食管癌的發生發展中發揮著十分重要的促進作用，而5-脂氧合酶(5-lipoxygenase，5-LO)是機體催化花生四烯酸生成生物活性分子從而影響細胞信號傳導及代謝的關鍵酶。

人類的5-LO基因定位于第10號染色體p11.2亞帶，長度超過82kb，包括14個外顯子和13個內含子，5-LO蛋白包含674個氨基酸，編碼蛋白的分子量約為72～80KD。其cDNA760位的G突變成A，760G＞A位于第六個外顯子中，在基因庫中也有記載，其對應的254位的氨基酸由帶負電荷的谷氨酸(E)突變成帶正電荷的賴氨酸(K)，這一單核苷酸多態性(SNP)引起了電荷的改變對酶的功能或者該酶與其他酶之間的相互作用都有可能受影響。有研究證明我國人群中5-脂氧合酶基因E254K多態性與哮喘的發生有關，與食管癌的發生是否有關尚不清楚。該研究的目的在于檢測該多態性在食管癌患者中的分布情況，同時與正常人群中的分布情況進行對比，進而揭示該多態性與食管癌發生的關系。

該研究證實，5-LO cDNA第760位的堿基G突變成堿基A，使相應的254位氨基酸由谷氨酸Glu(E)變成了賴氨酸Lys(K)。該突變與食管癌的發生高度相關，該結果為家族性食管癌發生提供了一個新的機制。