[發(fā)明專利]一種辣木的組織培養(yǎng)快繁方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710344865.3
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107018904A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙一鶴;吳義軍;施蕊;張靜美;夏菁
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省林業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司53100
• 代理人: 徐玲菊,蔣文睿

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種辣木的組織培養(yǎng)快繁方法，屬于苗木培育技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

目前，國內(nèi)關(guān)于辣木快速繁殖的文獻(xiàn)還很少。黎國運(yùn)等以當(dāng)年生辣木實(shí)生苗頂芽、幼嫩側(cè)芽為繁殖材料，采用芽器官離體培養(yǎng)快速繁殖，不經(jīng)過愈傷組織獲得大量叢生芽，壯苗生根，大田移栽獲得成功，首次對辣木的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了探索。2007年是對辣木組織培養(yǎng)技術(shù)研究較多的一年，馬崇堅(jiān)等采用實(shí)生種子萌發(fā)誘導(dǎo)無菌苗，通過愈傷組織發(fā)生途徑，對辣木愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽的誘導(dǎo)及增殖、生根培養(yǎng)基的配方和移栽等問題進(jìn)行了探討。羅云霞等利用辣木種子產(chǎn)生不定芽的微繁殖，對辣木的種子消毒方法，以及不定芽誘導(dǎo)、增殖、生根培養(yǎng)基的配方和移栽基質(zhì)進(jìn)行了探討。向素瓊等對M. oleifera Lam.（辣木、印度傳統(tǒng)辣木）和M. stenopetala (Baker f.) Cufod.（非洲辣木）兩種基因型的不同外植體材料進(jìn)行了離體培養(yǎng)，篩選了最適外植體材料，并對愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽分化的培養(yǎng)基條件進(jìn)行了選擇。向素瓊等、張潔等還對秋水仙素對離體培養(yǎng)辣木多倍體的誘導(dǎo)進(jìn)行了研究，獲得了四倍體再生植株。此后，又有王洪峰等選用印度改良辣木的幼苗莖段、朱尾銀選用選優(yōu)樹新長出的嫩芽經(jīng)外植體消毒后，進(jìn)行了不定芽初代誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)和生根苗移植試驗(yàn)，并對微繁體系建立過程中繼代苗的玻璃化、生根苗黃化及愈傷頭過大、移栽過程中的管理等問題進(jìn)行了討論。對辣木組織培養(yǎng)較為系統(tǒng)的研究是2012年趙翠翠通過器官發(fā)生途徑建立和優(yōu)化了辣木組織培養(yǎng)再生體系，對辣木的組培快繁體系的建立和相關(guān)機(jī)理進(jìn)行的研究。她所采用的原材料包括新鮮和儲藏一年的種子、1-2年生的嫩枝，研究的內(nèi)容包括：原材料的消毒；愈傷組織的誘導(dǎo)、形態(tài)、活力、生理生化；探討不同外植體器官直接發(fā)生途徑的培養(yǎng)條件；煉苗移栽等。

利用組培技術(shù)對原材料的需求量較小，可以周年生產(chǎn)，不受季節(jié)限制，所獲得的再生植株以幾何倍數(shù)大量繁殖，后代遺傳性狀穩(wěn)定、無病毒，能夠保持親本的優(yōu)良性狀，具有其他繁殖方式不可比擬的優(yōu)越性。但對組培操作技術(shù)要求嚴(yán)格，隨著繼代周期增加，畸形苗發(fā)生率、玻璃化情況、褐變情況增加，且成本投入較大等等成為制約組培技術(shù)發(fā)展的瓶頸。

利用組織培養(yǎng)技術(shù)對辣木進(jìn)行快速繁殖，可節(jié)約繁殖材料，縮短繁殖周期，大量提供無性系幼苗，并且保持母本的優(yōu)良性狀，提高經(jīng)濟(jì)效益。以前有些學(xué)者對辣木組培技術(shù)進(jìn)行了研究，但研究成果在辣木苗木生產(chǎn)上的應(yīng)用尚不普遍，究其原因，現(xiàn)有組培研究中技術(shù)要求過于復(fù)雜、不具有普遍適用性、組培過程中遇到的問題還沒有有效解決辦法、再生植株成活率低等是主要的因素，辣木組培技術(shù)還有很大發(fā)展空間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種辣木的組織培養(yǎng)快繁方法，利用生物技術(shù)結(jié)合常規(guī)育種方式來實(shí)現(xiàn)對優(yōu)質(zhì)辣木的種質(zhì)資源進(jìn)行保存，研究出辣木的組織培養(yǎng)生根配方，以解決現(xiàn)有技術(shù)的不足和難題。

為實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下所示：一種辣木的組織培養(yǎng)快繁方法，經(jīng)過下列各步驟：

（1）辣木種子的消毒和萌發(fā)：去除外殼后立即在超凈工作臺上對已剝殼的種胚進(jìn)行消毒處理，消毒處理的方法為先用75%酒精溶液振蕩清洗30s，再在0.1%升汞溶液中振蕩浸泡20min，最后用無菌水清洗6次；辣木種子的發(fā)芽溫度為25~28℃；當(dāng)種子萌發(fā)后大部分無菌苗長至3~4cm時，切去根及子葉，將上胚軸作為不定芽誘導(dǎo)的材料；

（2）不定芽誘導(dǎo)：將步驟（1）所得上胚軸接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中：MS+0.1~0.5mg/L6-BA+0.01~0.05mg/L NAA+20.0g/L蔗糖+2.75 g/L瓊脂，pH為5.8~5.9，并于25±2℃、自然光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)以誘導(dǎo)不定芽發(fā)生，當(dāng)誘導(dǎo)的叢芽或單芽生長到3~5cm時，切取生長較為一致、健康且不帶或帶少量愈傷的單芽；

（3）繼代增殖：將步驟（2）的單芽接種到繼代增殖培養(yǎng)基：MS+0.1~0.5 mg/L 6-BA+0.01~0.05 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖+2.75 g/L瓊脂，pH為5.8~5.9，并于25±2℃、自然光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）所得繼代過1代，苗高2~5cm的培養(yǎng)物接種于生根培養(yǎng)基中：1/2 MS+0.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖+2.75 g/L瓊脂，pH為5.8~5.9，并于25±2℃、自然光照條件進(jìn)行生根培養(yǎng)，即完成辣木的組織培養(yǎng)快繁。