[發明專利]一種沼澤小葉樺離體芽快繁方法

在審

• 申請號: 201710344595.6
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107155884A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 汪貴斌;王新;吳雅瓊;陸越
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙)32274
• 代理人: 邱興天

技術領域

本發明涉及植物組織培養領域，尤其涉及一種沼澤小葉樺離體芽快繁方法。

技術背景

我國大陸沿海海岸線長18000km，擁有灘涂面積21709km²，且以每年300km²的速度繼續淤長。灘涂生態系統受海陸系統的雙重干擾，土壤發育時間短，鹽分含量高，造成了灘涂自然生態新系統的脆弱性和不穩定性。加之臺風、暴雨、冰雹、龍卷風等災害性天氣頻繁，每年造成的經濟損失達10.6億元，當地生態安全和社會經濟發展受到嚴重影響。目前，沿海灘涂造林樹種缺乏，大面積的灘涂處于荒蕪狀態，選育和引進耐鹽樹種成為沿海灘涂造林綠化、合理開發和利用的關鍵。

沼澤小葉樺為落葉小喬木，具有較強的耐鹽和耐水能力，可在高鹽、高水位環境下生長，在沿海和低濕地上具有應用的潛力。調查發現，我國約有500余種鹽生植物，其中木本植物所占比例稀少，由于沼澤小葉樺在改造和利用鹽漬土方面特性，將是優良的候選樹種之一。在我國廣闊的東部沿海灘涂地區，如果能將沼澤小葉樺引種到這些地區，將能豐富該地區的植被類型，改善生態環境。

然而，沼澤小葉樺是極為稀有和瀕臨滅絕的溫帶落葉闊葉樹種，為國家二級重點保護瀕危植物，其嫩枝扦插極難生根，目前主要采用種子繁殖，不能規模化育苗，嚴重限制了沼澤小葉樺的引種移栽及深入研究。因此，需要采取其他方式來提高其繁殖能力。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術存在的外植體污染、褐化、玻璃化現象等阻礙植物組培工作的問題，提供一種繁殖速度快，生產周期短、增殖系數高且成活率高的沼澤小葉樺離體芽快繁方法，通過外植體選擇及消毒、啟動誘導培養、繼代增殖培養、生根誘導培養、煉苗移栽等過程實現沼澤小葉樺離體快繁。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

一種沼澤小葉樺的離體芽快繁方法，包括以下步驟：

1)挑選株高1～1.5m的未萌動的健壯植株，4～5月份采主枝頂芽、主枝側芽、側枝頂芽的新生芽作為外植體；

2)在超凈工作臺上，先用70％的酒精處理外植體20s，再用0.1％升汞消毒5～20min，10％NaClO消毒0～20min，用無菌水沖洗數次；

3)將處理好的外植體在無菌的條件下接種到初代培養基上，初代培養基成分為：MS+0.6～1.5mg/L 6-BA+0.5～1.0g/L PVP，培養20d以上；

4)將外植體轉入增殖培養基，增殖培養基成分為：MS+0.4～0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA，培養時間20d以上獲得小苗；

5)將小苗進行生根培養，生根培養基成分：MS+0.1～0.5mg/L NAA，或1/2MS+0～0.5mg/L NAA，培養20d以上；

7)煉苗移栽：選擇健壯的無菌苗，用多菌靈溶液浸泡清洗后，移栽到已消毒的蛭石+珍珠巖的基質中，先保濕培養一周，逐漸去掉蓋子。

步驟1)中，在新生芽萌動前，用50％的多菌靈可濕性粉劑噴灑植株，一周兩次，直到植株吐芽、取材為止。

步驟1)中，從健壯枝條上采回新生芽，用試管刷蘸洗衣粉輕輕刷洗，流水沖洗表面污物2～3h。

步驟2)中，先用70％酒精處理20s，再配合0.1％升汞處理10min，后用無菌水沖洗4-5次。

步驟3)中，初代培養基成分為：MS+0.8～1.0mg/L 6-BA+1.0g/L PVP。

步驟4)中，增殖培養基成分為：MS+0.6mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA，或MS+0.4mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA。

步驟5)中，生根培養基成分：MS或1/2MS+0.1或0.5mg/L NAA。

有益效果：與現有的技術相比，本發明以沼澤小葉樺離體芽為外植體，建立了組培繁殖體系。通過酒精和升汞預處理母本材料，大大降低了外植體的污染率，使外植體成活率最高可達74.19％，污染率降為25.81％。初代培養基中添加PVP，使褐化現象消失，大大降低了組培風險，提高了成活率。本方法得到的組培苗具有增殖系數高，生根率高，栽植成活力高等特點。有利于沼澤小葉樺的保護與開發，具有廣泛應用前景。

附圖說明

圖1是6-BA濃度過高時，初生代培養無菌苗圖。

圖2是取材時間對污染率的影響結果圖。