[發明專利]一種酶法處理麥芽糊精制備分支環糊精的方法及其應用有效
| 申請號: | 201710343350.1 | 申請日: | 2017-05-16 |
| 公開(公告)號: | CN107177647B | 公開(公告)日: | 2019-11-26 |
| 發明(設計)人: | 柏玉香;金征宇;夏柳溪;吳云;徐學明;謝正軍;王金鵬;周星 | 申請(專利權)人: | 江南大學 |
| 主分類號: | C12P19/20 | 分類號: | C12P19/20;C12P19/18;C12P19/04 |
| 代理公司: | 32228 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) | 代理人: | 聶啟新<國際申請>=<國際公布>=<進入 |
| 地址: | 214122 江蘇*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 處理 麥芽 糊精 制備 分支 環糊精 方法 及其 應用 | ||
本發明公開了一種酶法處理麥芽糊精制備分支環糊精的方法及其應用,該方法包括如下步驟:(1)將麥芽糊精溶于磷酸鹽緩沖液中,加入CGTase酶進行反應;(2)采用物理的方法降低酶活;(3)向步驟(2)的反應體系中加入糖化酶進行反應,高溫滅酶,制得分支環糊精。本發明方法反應條件溫和,同時利用CGTase微弱的耦合活力可以水解掉環狀糊精及未反應的底物,從而實現分支環糊精的有效分離。
技術領域
本發明涉及分支環糊精的合成技術領域,尤其是涉及一種通過雙酶復合法制備分支環糊精的方法及其應用。
背景技術
環糊精也稱作環麥芽寡糖,是由若干α-D吡喃葡萄糖單元通過α-1,4糖苷鍵鏈接而成的一類低聚糖的總稱。環糊精因其水溶性較差、具有較高的溶血性和腎毒性導致其應用收到嚴重的限制,因此對環糊精的改性十分必要。
環糊精的改性方法有化學法或生物酶的方法來修飾環糊精,將某些特定的取代基接枝到環糊精上,這種在保留環糊精空腔結構基本不變的情況下引入取代基團而得到的改性產物,通常稱之為修飾環糊精,或改性環糊精,或環糊精衍生物。當取代基為糖基時,通常將其稱之為分支環糊精,如葡萄糖基環糊精、麥芽糖基環糊精、半乳糖基環糊精和甘露糖環糊精等。
相比于環糊精,分支環糊精具有更好的水溶性、更低的腎毒性及溶血性而被廣泛應用。
發明內容
針對現有技術存在的上述問題,本發明申請人提供了一種酶法處理麥芽糊精制備分支環糊精的方法。本發明方法反應條件溫和,同時利用CGTase微弱的耦合活力可以水解環狀糊精及未反應的底物,從而實現分支環糊精的有效分離;此外,本發明方法可延伸應用至普魯蘭酶制備分支環糊精方法的分離步驟。
本發明的技術方案如下:
一種酶法處理麥芽糊精制備分支環糊精的方法,所述方法包括如下具體步驟:
(1)將麥芽糊精溶于磷酸鹽緩沖液中,加入CGTase酶反應12-24h;
(2)采用物理的方法降低酶活;
(3)向步驟(2)的反應體系中加入糖化酶反應12-24h,高溫滅酶,可制得分支環糊精。
步驟(1)中所述磷酸鹽緩沖液的pH在3.5-8.0。
步驟(1)中所述麥芽糊精的質量濃度為1%-5%。
步驟(2)中所述物理方法為70-100℃水浴加熱。
一種所述酶法處理麥芽糊精制備分支環糊精的方法的應用,所述方法可用于制備葡萄糖基-α-環糊精、葡萄糖基-β-環糊精、葡萄糖基-γ-環糊精。
用于制備葡萄糖基-α-環糊精時,具體步驟為:
(1)將麥芽糊精溶于磷酸鹽緩沖液中,加入α-CGTase酶反應12-24h;
(2)采用物理的方法降低酶活;
(3)向步驟(2)的反應體系中加入糖化酶反應12-24h,高溫滅酶,可制得含有葡萄糖基-α-環糊精的混合物;
(4)利用高效液相的方法對步驟(3)所得到的混合物進行分離純化,最終制得所述葡萄糖基-α-環糊精;
所述磷酸鹽緩沖液的pH在3.5-8.0;所述麥芽糊精的質量濃度為1%-5%;所述物理方法為70-100℃水浴加熱。
用于制備葡萄糖基-β-環糊精時,具體步驟為:
(1)將麥芽糊精溶于磷酸鹽緩沖液中,加入β-CGTase酶反應12-24h;
(2)采用物理的方法降低酶活;
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