[發明專利]一種水青樹的組培繁育方法

在審

• 申請號: 201710341700.0
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107410023A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 周克斌
• 申請（專利權）人: 安徽梅蘭園林景觀工程有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥道正企智知識產權代理有限公司34130
• 代理人: 閆艷艷

技術領域

本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及一種水青樹的組培繁育方法。

背景技術

水青樹，稀有種。水青樹科落葉喬木，第三紀古老孑遺珍稀植物，分布于陜西南部、甘肅東南部、四川中南部和北部等地，生于海拔1100～3500米處的常綠、落葉闊葉林中或林緣。分布于中國的陜西、甘肅、湖北、四川、貴州、云南等省及印度的北部、緬甸北部、尼泊爾和不丹。水青樹的木材無導管，對研究中國古代植物區系的演化、被子植物系統和起源具有重要科學價值，是國家二級保護樹種。

以往水青樹苗木培育技術主要有二種，一是種子培育，即在水青樹種子成熟期，從水青樹上采摘果實，把果實經地過去皮處理，得到種子，然后通過對種子適當的處理進步播種催芽培育苗木；其二是扦插繁育，即從水青樹上采摘半木質化的穗條，用激素處理穗條后，把穗條插入適當的基質中培育苗木。

水青樹苗木的培育主要依靠種子繁育實生苗。但種子繁育苗木存在如下缺點，一是種子育苗季節性強，一年一茬，種子保存時間不長，半年之后發芽率大幅下降；二是經科學選育的良種一般種子都很少，難以滿足生產應用的需求，而營建種子園投資大，周期長；三是種子培育苗木不能培育無性系，生產上林份分化大，林相參差不齊，對經過選擇表現優良的單株，無法實現規模利用。

水青樹扦插繁育的缺點是，一是老樹穗條成活率低，因此需要營建扦插用的采穗圃，經過修剪矮化，培育合適的冠形，多產穗條。采穗圃需要精細化管理，必須投入大量的人工，在勞動力成本日漸高漲的今日，采穗圃管理成本難以承受；二是采穗母株容易老化，使用周期不長，3-5年后即要淘汰；三是扦插成活率受天氣、管理、基質、生根素等諸多因素的影響，往往成活率難以保證；四是苗木價格偏高，市場難以接受。

因為水青樹作為稀有瀕危物種，保存其原有的優良性狀是非常重要的，因此研究水青樹無性系組培繁育的新技術有非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的提供一種水青樹的組培繁育方法，該種水青樹繁育方法不受季節影響，培育時間短，繁殖速率快，解決了目前水青樹扦插成活率低、繁殖周期長、品質退化等問題，實現了水青樹良種大規模繁育。

為了達到上述目的，本發明通過以下技術方案來實現的：

一種水青樹的組培繁育方法，按照以下步驟進行：

（1）外植體的選擇及消毒：從健壯的水青樹植株上獲取水青樹莖段外植體，將莖段先用滅菌凈600倍液消毒25～35min，無菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐溫80，處理3～5min，無菌水清洗2～4次，消毒后備用；

（2）水青樹提取液的制備：取適量新鮮嫩綠的水青樹葉片加入到開放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態煎煮2-3h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，之后倒出提取液至液體存儲罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態煎煮2-3h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，倒出提取液至同一液體存儲罐中，最后濃縮液體存儲罐中的提取液，使其比重為1.12，得水青樹提取液；

（3）初代誘導培養：把步驟（1）經消毒的莖段，接種到初代誘導培養基上，經過12～20d的培養，直至所述莖段長出新芽，其中初代誘導培養基為1/2MS+水青樹提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+營養液2.0～6.0g/L；

（4）繼代增殖培養：待所述新芽在初代誘導中培養20d后，將新芽切割下來，接到繼代增殖培養基上培養，在增殖培養基培養10～20d，就會形成叢生芽，所述的增殖培養基為1/2MS+水青樹提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂2.0～6.0g/L；

（5）組培苗生根：待步驟（4）的叢生芽的單芽長到2.0～3.6cm長時，選取葉片展開的單芽，分割下來接到生根培養基中誘導生根，在生根培養基中培養15～25d，莖基部誘導出根，所述的生根培養基為1/4MS+水青樹提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～0.03g/L+蔗糖10～20g/L+瓊脂2.0～4.0g/L；