[發明專利]一種水青樹的組培繁育方法

在審

• 申請號: 201710341700.0
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107410023A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 周克斌
• 申請（專利權）人: 安徽梅蘭園林景觀工程有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥道正企智知識產權代理有限公司34130
• 代理人: 閆艷艷

1.一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）外植體的選擇及消毒：從健壯的水青樹植株上獲取水青樹莖段外植體，將莖段先用滅菌凈600倍液消毒25～35min，無菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐溫80，處理3～5min，無菌水清洗2～4次，消毒后備用；

（2）水青樹提取液的制備：取適量新鮮嫩綠的水青樹葉片加入到開放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態煎煮2-3h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，之后倒出提取液至液體存儲罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態煎煮2-3h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，倒出提取液至同一液體存儲罐中，最后濃縮液體存儲罐中的提取液，使其比重為1.12，得水青樹提取液；

（3）初代誘導培養：把步驟（1）經消毒的莖段，接種到初代誘導培養基上，經過12～20d的培養，直至所述莖段長出新芽，其中初代誘導培養基為1/2MS+水青樹提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+營養液2.0～6.0g/L；

（4）繼代增殖培養：待所述新芽在初代誘導中培養20d后，將新芽切割下來，接到繼代增殖培養基上培養，在增殖培養基培養10～20d，就會形成叢生芽，所述的增殖培養基為1/2MS+水青樹提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+瓊脂2.0～6.0g/L；

（5）組培苗生根：待步驟（4）的叢生芽的單芽長到2.0～3.6cm長時，選取葉片展開的單芽，分割下來接到生根培養基中誘導生根，在生根培養基中培養15～25d，莖基部誘導出根，所述的生根培養基為1/4MS+水青樹提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～0.03g/L+蔗糖10～20g/L+瓊脂2.0～4.0g/L；

（6）試管苗的馴化和移栽：將水青樹生根試管苗從培養室移至塑料大棚放置6～10d后，去瓶蓋煉苗4～6d，然后從瓶內取出水青樹幼苗，用水輕輕洗凈培養基，將待栽的水青樹幼苗根部用0.1％多菌靈處理1～2min后，將幼苗移栽入穴盤中的栽培基質內，覆膜保濕4～6d，其間上午及下午各通風透氣一次，每次20～30min，遮蔭65-75%，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，噴施1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m²的用量進行噴施，此后進行正常的栽培管理，即可。

2.根據權利要求1所述的一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，所述初代誘導培養基為1/2MS+水青樹提取液0.8g/L+6-BA 0.06g/L+NAA 0.04g/L+蔗糖20g/L+營養液4.0g/L。

3.根據權利要求2所述的一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，所述營養液包括以下組份及其對應的濃度：

硫酸銨0.2～0.4g/L、二水氯化鈣0.1～0.3g/L、七水硫酸鎂0.1～0.3g/L、無水磷酸二氫鉀0.4～0.6g/L、硫酸鋅0.1～0.3g/L、碘化鉀0.2～0.4mg/L。

4.根據權利要求1所述的一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，所述的增殖培養基為1/2MS+水青樹提取液1.0g/L+6-BA 0.07g/L+NAA 0.05g/L+蔗糖25g/L+瓊脂4.0g/L。

5.根據權利要求1所述的一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，所述的生根培養基為1/4MS+水青樹提取液0.5g/L+IBA 0.03g/L+NAA 0.02g/L+蔗糖15g/L+瓊脂3.0g/L。

6.根據權利要求1所述的一種水青樹的組培繁育方法，其特征在于，所述初代誘導培養、繼代增殖培養以及組培苗生根的培養條件：環境溫度25±2℃，光照時間12～16h/d，光照強度為1600～2000lx。