[發(fā)明專(zhuān)利]一種軸向單分子高精度定位方法和裝置

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710341359.9
• 申請(qǐng)日: 2017-05-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108872164A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈策;徐濤;付彥輝;張翔;紀(jì)偉;羅志勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64;G02B21/00;G02B21/36
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 曹少華

1.一種軸向單分子高精度定位方法，其特征在于：

(a)首先將實(shí)驗(yàn)樣品的位置調(diào)整到顯微鏡物鏡焦平面上；

(b)然后激光A低能量照射實(shí)驗(yàn)樣品表面，激活出焦面處的幾個(gè)熒光分子，激光B照射樣品激發(fā)出熒光分子，位移臺(tái)在焦面處上下各移動(dòng)200nm，EMCCD記錄下各處圖像，再使用激光B長(zhǎng)時(shí)間照射樣品對(duì)熒光分子進(jìn)行漂白，之后分別用激光A和激光B來(lái)激活和漂白其他的熒光分子，并進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)，當(dāng)循環(huán)持續(xù)上百次后，得到樣品內(nèi)熒光分子在軸向的圖像；

(c)將得到的圖像進(jìn)行高斯光強(qiáng)擬合，根據(jù)軸向高斯光強(qiáng)分布響應(yīng)曲線進(jìn)行曲線擬合，通過(guò)曲線擬合斜率計(jì)算得到熒光分子的精確位置。

2.一種軸向單分子高精度定位裝置，包括激光器A、激光器B、物鏡、三維樣品位移臺(tái)、軸向定位系統(tǒng)等；激光器A和激光器B用于對(duì)熒光分子的激發(fā)和激活。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種軸向單分子高精度定位裝置，其特征在于：激光器A和激光器B后在水平光路上依次安裝有物鏡、三維樣品位移臺(tái)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種軸向單分子高精度定位裝置，其特征在于：軸向定位系統(tǒng)由分光棱鏡、透鏡和EMCCD組成，熒光進(jìn)入軸向定位系統(tǒng)后，經(jīng)透鏡成像在EMCCD處。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種軸向單分子高精度定位裝置，其特征在于：EMCCD的位置相對(duì)焦點(diǎn)是對(duì)稱(chēng)的。