[發明專利]一種具有抗菌和抗氧化雙活性的苦蕎活性肽的制備方法

有效

• 申請號: 201710341110.8
• 申請日: 2017-05-16
• 公開（公告）號: CN107058433B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 李莉蓉;尚東亮;陳翠紅;鐘嚴
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/34;C12R1/785;C12R1/67;C12R1/685
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本發明公開一種具有抗菌和抗氧化雙活性的苦蕎活性肽的制備方法，屬生物工程領域。本發明利用食品工業用絲狀真菌為固態發酵菌株，以苦蕎為發酵基質制備，通過固態發酵、超聲提取、離心收集、膜過濾等步驟得到具有抗菌和抗氧化雙活性的苦蕎活性肽。本發明工藝簡單、原料來源廣泛、成本低、得率高、產品安全無毒、無殘留，且制備的活性肽抗菌活性強，同時具有好的自由基清除活性，可應用于食品防腐保鮮、飼料添加劑及化妝品抗氧化等，在天然抗菌和抗氧化方面具有潛在利用價值。

技術領域

本發明涉及一種具有抗菌和抗氧化雙活性的苦蕎活性肽的制備方法，屬于生物活性肽的制備領域。

背景技術

食品腐敗菌、致病菌引起的食品腐敗變質和食品成分的氧化變質可影響食品品質及食品安全。這兩種食品變質不僅會造成經濟損失，甚至危害公眾健康，給食品安全帶來巨大壓力。如何防治食品微生物變質和氧化變質是食品工業要解決的重要問題。目前通過食品加工或添加防腐劑、抗氧化劑是預防食品微生物變質和食品氧化變質的主要措施。但是加工過程對食品營養的影響、非食品成分的添加，以及化學防腐劑和抗氧化劑對食品感官品質的影響、在食品體系中的使用范圍窄、化學添加劑自身毒副作用以及化學添加劑攝入后在體內殘留等缺點是不容忽視的。隨著人們消費方式的改變和對食品安全及自身健康的關注，追求更天然、更少化學殘留和更少加工過程的健康食品是食品工業發展的一個新方向，這就需要更天然、更有效、更安全的生物防腐劑和抗氧化劑來防控食品的微生物及氧化變質。

生物活性肽是蛋白中具有一種或多種特定活性如抗氧化、抗微生物、抗高血壓等，長度在2~20個氨基酸的序列，因其低毒、高活性的特點，在食品、醫藥等領域引起廣泛關注。抗菌肽是一類具有抗微生物活性的生物活性肽，屬于抗生素家族。它們除了對細菌、真菌有抑菌活性以外，有的抗菌肽對腫瘤細胞、病毒等也具有毒性。抗菌肽在體內最終酶解為氨基酸，無殘留毒性。抗氧化肽是具有抑制脂質過氧化和清除自由基功能的一類生物活性肽。與傳統的化學抗氧化劑相比，抗氧化肽對人體潛在危害更小，因此越來越多的抗氧化肽被發現，特別是蛋白酶解肽。因此，以天然具有抗菌和抗氧化活性的活性肽為基礎解決食品變質問題具有重要意義。

獲得天然活性肽的化學法和酶解法存在程序繁瑣、化學試劑殘留、費用高等缺點；微生物液態發酵法的培養基組成復雜、發酵產物濃度低、能耗高。固態發酵法則有培養基簡單、產率高、能耗低、環境污染較少等優點。目前固態發酵法制備活性肽主要集中在對抗氧化肽的研究，而固態發酵制備抗菌肽的研究甚少。

中國專利CN103333937A一種利用枯草芽孢桿菌制備抗菌肽的工藝方法采用分批補料深層液體發酵方式，培養基成分復雜、設備投資大、操作工藝繁瑣。中國專利CN101381757A公開了抗菌肽的固態發酵制備方法，這種方法前期需要將抗菌肽基因轉入真菌并馴化真菌菌種的復雜工藝，且制備抗菌肽的培養基還需加入尿素、鉀鹽和生物素這些化學物質，培養基成分復雜。

我國蕎麥資源豐富，是特色糧食作物苦蕎的起源中心之一。苦蕎是一種糧藥兼用的糧食經濟作物，苦蕎的蛋白質含量約為10～15%，且50%以上是清蛋白和球蛋白。但目前苦蕎利用率不高、產品附加值低。以資源豐富的苦蕎為原料，固態發酵制備抗菌及抗氧化雙活性肽對活性肽的簡單、大量制備及苦蕎的深加工和高值化利用有重要意義。

發明內容

本發明提供一種具有抗菌和抗氧化雙活性的苦蕎活性肽的制備方法，該苦蕎活性肽可應用于食品、飼料和化妝品行業中。包括如下步驟：

（1）將真菌孢子接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養基上，28～30℃，相對濕度70～90%，培養5～7天后用無菌生理鹽水沖洗下真菌孢子，調整孢子懸液濃度為1×10⁶～1×10⁸個/mL，得到真菌孢子懸液；

（2）取苦蕎粉80～200g、蒸餾水40～100mL置于發酵瓶中，蓋上封口膜，121℃滅菌20～30min，即得苦蕎固態發酵培養基；