[發明專利]用于檢測HER2基因的FISH探針、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710338896.8
• 申請日: 2017-05-15
• 公開（公告）號: CN107245514A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 許寶芝;秦穎;白蛟騰;楊凱麗
• 申請（專利權）人: 德路通（石家莊）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/10;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊旭昌知識產權代理事務所(特殊普通合伙)13126
• 代理人: 彭隨麗

1.一種用于檢測HER2基因的FISH探針的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

a、提取探針合成模板：利用基因組DNA提取試劑盒提取人類基因組DNA，作為HER2基因以及17號染色體著絲粒區域檢測探針合成的模板；

b、第一步PCR反應：采用第一組PCR反應引物，以人體基因組DNA為模板，進行PCR體系的擴增，得到DNA產物；

c、第二步PCR反應：采用第二組PCR反應引物，以與其對應的第一步PCR反應獲得的DNA產物為模板進行PCR體系的擴增，得到第二步PCR反應產物；

d、純化：將第二步PCR反應產物進行瓊脂糖凝膠電泳，采用PCR產物凝膠回收試劑盒進行切膠、回收、純化，得到檢測HER2基因的FISH探針；

所述的第一組PCR反應引物包括HER2基因第一組PCR反應引物和17號染色體著絲粒區域第一組PCR反應引物；

所述的第二組PCR反應引物包括HER2基因第二組PCR反應引物和17號染色體著絲粒區域第二組PCR反應引物。

2.根據權利要求1所述的用于檢測HER2基因的FISH探針的制備方法，其特征在于，步驟b第一步PCR反應中包含以下組分：反應引物、模板、2×Es Taq MasterMix。

3.根據權利要求2所述的用于檢測HER2基因的FISH探針的制備方法，其特征在于，步驟c第二步PCR反應中包含以下組分：反應引物、模板、dNTP、熒光標記的dUTP、Taq DNA聚合酶、含Mg²⁺的10×Taq酶反應緩沖液。

4.根據權利要求1所述的用于檢測HER2基因的FISH探針的制備方法，其特征在于，

所述HER2基因第一組PCR反應引物包括以下15對：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30；

所述HER2基因第二組PCR反應引物包括以下15對：SEQ ID NO.46和SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48和SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50和SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52和SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.54和SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58和SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.60和SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62和SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.64和SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.66和SEQ ID NO.67、SEQ ID NO.68和SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.70和SEQ ID NO.71、SEQ ID NO.72和SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.74和SEQ ID NO.75。