[發明專利]一種黃曲霉毒素限進介質-分子印跡分離介質的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201710337004.2
• 申請日: 2017-05-14
• 公開（公告）號: CN107216422B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 何娟;許紅;宋立新;陳寧寧;李媛媛;魏宏亮
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: C08F222/14
• 分類號: C08F222/14;C08F220/06;C08F220/32;C08F220/56;C08F8/12;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30
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本發明屬于分離介質制備技術領域，特別涉及一種限進介質和印跡聚合物結合的分離介質，并以此作為固相萃取柱的填料應用于復雜基質中黃曲霉毒素選擇性的富集、分離。所述印跡聚合物以黃曲霉毒素的結構類似物作為替代模板，將印跡聚合物與限進介質相結合，制得黃曲霉毒素的限進介質?分子印跡分離介質。本發明所制備的分離介質兼具對黃曲霉毒素選擇性的富集和對蛋白質大分子的排阻，將其應用于復雜基質的樣品前處理中，達到較好的凈化、富集效果，有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于分離介質制備技術領域，特別涉及一種適用于復雜基質中對黃曲霉毒素具有特異性分子識別能力的限進介質-印跡聚合物的制備方法及其應用。

背景技術

黃曲霉毒素（Aflatoxins，AF）主要由黃曲霉和寄生曲霉在霉變過程中產生的次生代謝產物，具有廣泛的污染范圍特別是對農產品的污染，如大米、小麥、玉米、大豆、高粱和花生等糧食作物，既可在各種農作物、植物及其產品的儲藏、制備與加工過程中產生，也會對以我國傳統的植物性中藥材及其制品造成污染。

黃曲霉毒素對人類和動物的毒性極大而且毒害作用多樣。例如，暴露在黃曲霉毒素中會損害中樞神經，心血管和呼吸系統，引起急性和慢性毒性或死亡。動物一旦攝入了被真菌毒素污染的飼料，其乳、肉、蛋中能積累、殘留這些真菌毒素。通過食物鏈的轉化，這些被污染的食物進入人或動物的的體內, 會導致突變，畸形和降低免疫力等。

由于黃曲霉毒素對各類食物的嚴重污染和對人類健康的嚴重威脅，已成為全世界關注的焦點，因此迫切需要建立一種簡單、快速、準確、靈敏、特異、經濟的檢測方法去控制和監測真菌毒素的污染，保障人類的身體健康。目前已建立的分析檢測方法主要有薄層色譜法、免疫親和柱-高效液相色譜法和紫外、熒光、質譜檢測器以及酶聯免疫吸附試驗。但真菌毒素多為痕量檢測，且受污染的對象基質多比較復雜，增大了檢測難度，因此其前處理技術的好壞在很大程度上決定了檢測結果的準確與否。

目前黃曲霉毒素的前處理除了液液萃取、固相萃取等傳統方法外，免疫親合柱是常用的樣品前處理方法，但免疫親合柱的凈化效果容易受樣品基質、pH、溶劑、鹽濃度等的影響，同時其價格昂貴，難于重復使用，不適宜大面積推廣使用，很大程度上限制了黃曲霉毒素檢測的普及。

新近發展起來的分子印跡聚合物作為固相萃取柱的填料，以其高選擇性和特異性的吸附能力、重復性高、檢測線低、又不易受樣品基體的干擾的特點，正被逐漸應用到食品中對痕量有毒有害物質的前處理過程中，彌補了傳統固相萃取和免疫親和柱的不足。

由于真菌毒素有較強毒性和廣泛傳播性對試驗操作人員有很強的毒性作用，毒素獲取困難，價格昂貴。用毒素本身作模板分子會增加實驗的成本和操作的危險性，所以研究用毒素的結構類似物作為替代模板合成印跡聚合物，避免了其中的模板因未洗脫完全，對目標分析物的檢測造成干擾，降低對實驗人員的傷害，毒素的特異性吸附不會造成太大影響且符合環境友好的要求。本發明中采用黃曲霉毒素的結構類似物作為替代模板合成印跡聚合物。

當用固相萃取富集分離復雜基質中的小分子毒素目標物時，其中的生物大分子如蛋白質、油脂分子等，遇到疏水性反相固相萃取填料時會發生變性，變性后的大分子物質會吸附在填料的表面，嚴重干擾對目標物的分析測定。而限進介質作為固相萃取的吸附劑在一定程度上克服了上述不足。限進介質是一種外層具有親水性，內層具有富集能力的多功能材料，只要對其外表面進行適當的親水性修飾，就可保證生物大分子在吸附劑的外表面不會發生不可逆的變性和吸附，實現對大分子的排阻。本發明把限進介質與分子印跡結合起來構建新的分離體系，使其兼具對小分子選擇性的富集和對大分子的排阻，將具有極為廣闊的應用前景，目前尚未見報道。

發明內容