[發明專利]縊蟶C1q基因、編碼蛋白及其克隆方法和重組縊蟶C1q基因工程菌構建方法

有效

• 申請號: 201710331881.9
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107267519B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 李成華;崔毅;張衛衛;趙雪琳;邵銥娜
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

本發明公開了縊蟶C1q基因、編碼蛋白及其克隆方法和重組縊蟶C1q基因工程菌構建方法，特點是縊蟶C1q基因序列如SEQIDNO.1所示；其克隆方法為根據與C1q基因同源的表達序列標簽EST序列設計3’RACE的巢式引物，采用3’RACE技術擴增基因全長；縊蟶C1q基因編碼蛋白氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，用分別含有BamH I位點和Xho I位點的引物擴增縊蟶C1q蛋白；將克隆得到的目的基因插入載體獲得重組質粒，對重組質粒進行誘導表達，再進行純化即獲得基因工程菌，優點是對脂多糖、肽聚糖、甘露聚糖具有結合能力，對大腸桿菌、鰻弧菌和副溶血弧菌有明顯的凝集作用。

技術領域

本發明屬于分子生物學以及基因工程領域，尤其是涉及一種縊蟶C1q基因、編碼蛋白及其克隆方法和重組縊蟶C1q基因工程菌構建方法。

背景技術

C1q(Complement 1q)是經典補體途徑的靶標識別蛋白，作為一種重要識別分子并且能夠啟動經典補體途徑，是先天和適應免疫系統之間的主要連接環節。除了作為經典補體途徑的關鍵成分之外，C1q還涉及其他幾種免疫過程，包括通過清除細胞凋亡來維持免疫耐受，細菌吞噬，逆轉錄病毒的中和，細胞粘附和樹突狀細胞，B細胞和成纖維細胞的調節。研究發現有許多非補體蛋白也含有與補體C1q分子類似的C1q球狀結構域,統稱為含C1q結構域蛋白(C1q domain-containing protein，C1qDC protein)。含有球狀C1q結構域(C1qDC)蛋白，在C末端含有通用模式識別球狀C1q結構域，可結合各種配體并引發一系列免疫應答。在結構上，C1qDC結構域的特征在于緊密的膠卷β-三明治折疊，其由C末端的個殘基組成，具有八個高度保守的殘基。到目前為止，已經發現幾種無脊椎動物C1qDC蛋白作為模式識別受體(PRR)像凝集素一樣有凝集活性，可以直接與PAMPs結合并引發一系列免疫應答。許多C1qDC蛋白被認為是先天免疫中的多功能模式識別受體(PRR)，因為它們識別和結合病原體相關分子模式(PAMP)，然后引發快速增強的吞噬作用，導致有效的遏制病原體。除了PAMP之外，多種配體可以被C1qDC蛋白與其有效和通用的電荷模式識別結構域結合。包括某些逆轉錄病毒的包膜蛋白，脂多糖(LPS)，β-淀粉樣蛋白原纖維，來自革蘭氏陰性菌的肽聚糖，磷脂，凋亡細胞甚至一些急性期反應物。

C1qDC蛋白序列廣泛存在于哺乳動物、低等脊椎動物及無脊椎動物中。目前，在對無脊椎動物的研究中，主要集中在海灣扇貝(Wang et al.,2012)、文蛤(Sui et al.,2012)、長牡蠣(Jiang et al.,2015)等，針對縊蟶C1q蛋白的研究不是很充分。縊蟶C1q在PAMPs結合上的優越性，為解決縊蟶養殖業病害預防，開展健康養殖和實現養殖業可持續發展具有重要意義。

縊蟶(Sinonovacula constricta)俗名蟶子、蜻子，是屬于軟體動物門(Mollusca)雙殼綱(Bivalvia linnaeus)、簾蛤目(Veneroida)、截蟶科(Solecurtidae)，為廣溫廣鹽性海產貝類，廣泛分布于我國、日本和朝鮮等國的河口或有少量淡水注入的內灣潮間帶中、下區軟泥灘。其僅見于西太平洋，是我國、朝鮮和日本的特產，為重要的經濟軟體動物，與牡蠣、蛤仔、泥蚶一起號稱我國“四大養殖貝類”。由于其貝殼自殼頂至腹緣有一條微凹的斜溝，形似繩索的縊痕，因此而得名“縊蟶”。