[發明專利]縊蟶C1q基因、編碼蛋白及其克隆方法和重組縊蟶C1q基因工程菌構建方法

有效

• 申請號: 201710331881.9
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107267519B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 李成華;崔毅;張衛衛;趙雪琳;邵銥娜
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/435;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;C12R1/19
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 何仲

1.一種縊蟶C1q基因，其特征在于：該基因為SEQ ID NO.1所示的cDNA序列。

2.一種權利要求1所述的縊蟶C1q基因的克隆方法，其特征在于：根據與C1q基因同源的表達序列標簽EST序列設計基因特異性引物，采用RACE技術擴增基因全長，具體的步驟如下：

(1)通過對副溶血弧菌誘導縊蟶的cDNA文庫的表達序列標簽分析，發現了多條編碼C1q基因的表達序列標簽序列，選取編碼縊蟶C1q部分片段的表達序列標簽克隆；

(2)RACE引物設計：根據編碼縊蟶C1q部分片段的EST克隆設計3’RACE的巢式引物：3’上游特異性引物1：TGTGAACGACAGTAGTGACAGCAAA，3’上游特異性引物2：ATGGGCACAGAATGACCAACTAGAC，擴增3’接頭引物Adaptor3：GGCCACGCGTCGACTAGTACTT；

(3)RACE擴增獲取C1q基因全長序列，具體步驟如下：

a.總RNA提取：取縊蟶組織制備得到RNA提取液；

b.3’-RACE擴增：將RNA提取液用3’-Full RACE Core Set with PrimeScript ^TMRTase試劑盒逆轉錄合成擴增3’-RACE的模板，以此為模板，使用3’上游特異性引物1和擴增3’接頭引物進行PCR擴增，取PCR稀釋后的產物1ul作為模板，再用3’上游特異性引物2和擴增3’接頭引物進行PCR擴增得到3’端目的條帶；

c.將上述擴增產物的目的條帶用膠回收試劑盒回收，回收產物與載體pMD19-T連接，轉化至大腸桿菌Escherichia coli DH5α后，在含有氨芐濃度為50μg/mL的LB平板培養基中培養8-12h，挑取陽性克隆菌落，進行RCR驗證并送至上海生物工程有限公司測序，所得結果經DNAMAN軟件分析拼接得縊蟶C1q基因全長序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一種權利要求1所述的縊蟶C1q基因的編碼蛋白，其特征在于：該編碼蛋白為SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列。