[發明專利]一種同時獲得山銀花中物質成分和總抗氧化活性的檢測方法

有效

• 申請號: 201710330791.8
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN107144661B
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 張水寒;黃建華;周融融
• 申請（專利權）人: 湖南省中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/74;G01N30/14;G01N30/86
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明涉及一種同時獲得山銀花中物質成分和總抗氧化活性的檢測方法，包括：供試品溶液的制備；DPPH溶液的制備；配制一系列濃度梯度的VC溶液作為標準物質，以DPPH為清除對象，進行HPLC?DPPH分析，建立VC濃度與自由基清除率關系的回歸方程；將供試品溶液注入HPLC?DPPH分析系統，同時得到樣品的化學成分信息和樣品的自由基總清除率，代入所述回歸方程，得到樣品總抗氧化活性。本發明采用HPLC?DPPH在線聯用的方法，可以同時得到山銀花的化學指紋圖譜信息和總抗氧化活性，從而實現對山銀花質量控制進行“譜?效”同時評估的優點。

技術領域

本發明涉及一種HPLC-DPPH法同時檢測山銀花中化學物質信息和總抗氧 化活性的方法，屬于檢測分析技術領域。

背景技術

山銀花是忍冬科植物灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.、紅 腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、華南忍冬Lonicera confusa DC.或黃褐毛忍 冬Lonicera fulvotomentosa Hsu et S.C.Cheng的干燥花蕾或帶初開的花。具有清 熱解毒、涼散風熱的功效，常用于治療癰腫療瘡、喉痹，丹毒、熱毒血痢、風 熱感冒、溫病發熱。具有抗菌、抗病毒作用，為常用的大宗藥材，臨床應用廣 泛。但是目前的研究尚未建立在線進行山銀花抗氧化活性測試的方法，常采用 離線分步測定的方式進行活性測試，且單一的分析方法不能同時得到山銀花物 質信息和活性信息，不利于建立全面的質量控制體系。

中藥是傳統醫藥預防、治療疾病的物質基礎，是我國人民幾千年來的智慧 結晶。中藥質量的提升成為了促進我國傳統醫藥發展的基石。與化學藥物不同， 中藥及其相關制劑成分復雜，各物質之間的相互作用不明確。因此，通過對單 一成分進行測定的質量控制標準并不能滿足中藥的質量控制。本專利經過文獻 查閱，發現以化學指紋圖譜的方式評價中藥的質量往往集中于高含量、易識別 等成分，但缺乏對其藥理活性研究。通過“譜-效”相結合的方式作為質量控制 標準更具有科學性。將中藥的化學指紋圖譜信息與生物活性信息相結合，同時 作為中藥的質量控制標準，能全面的評價中藥質量的優劣。

HPLC-DPPH在線聯用技術是近幾年發展起來的新技術，將傳統的高效液相 色譜儀和DPPH抗氧化活性系統串聯，可以同時獲得物質的化學指紋信息和生 物活性信息，該技術能夠快速、實時、準確的獲得樣品的“譜-效”信息，為中 藥材的質量控制分析提供了新的方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種簡單、快速、準確的HPLC-DPPH在 線分析方法，可同時檢測樣品的化學物質和樣品總抗氧化活性。

本發明技術方案如下：

一種同時獲得山銀花中物質成分(綠原酸)和總抗氧化活性的檢測方法， 包括：

供試品溶液的制備；

DPPH溶液的制備；

配制一系列濃度梯度的VC(即維生素C)溶液作為標準物質，以DPPH為 清除對象，進行HPLC-DPPH分析，建立VC濃度與自由基清除率關系的回歸方 程；

將供試品溶液注入HPLC-DPPH分析系統，同時得到樣品的化學成分信息 和樣品的自由基總清除率，代入所述回歸方程，得到樣品總抗氧化活性。

進一步地，制備供試品溶液時先將待測樣品山銀花干燥粉碎，過三號篩。

進一步地，供試品溶液的制備方法包括：精密稱取山銀花樣品0.5g于50mL 錐形瓶中，加入10mL 60％乙醇，65℃下超聲30min(功率300W)，取2.0mL 上清液于EP管中，10000r/min離心；精密移取1.0mL上清液于25.0mL容量瓶 中，定容，即得供試品溶液。