[發明專利]一種人血漿轉鐵蛋白分離純化的方法

在審

• 申請號: 201710330353.1
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN107216384A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 何潔;郭采平;丁玉江;譚淑嫻;王錦才;張戰;張運佳;黃偉榮
• 申請（專利權）人: 深圳市衛光生物制品股份有限公司
• 主分類號: C07K14/79
• 分類號: C07K14/79;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司44202
• 代理人: 宋靜娜,郝傳鑫

1.一種人血漿轉鐵蛋白的分離純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將人血漿組分FIV-1蛋白沉淀溶解于緩沖液中，過濾，得濾液；

2)利用陰離子交換層析對步驟1)得到的濾液進行分離，收集含轉鐵蛋白的洗脫液；

3)將步驟2)得到的洗脫液進行病毒滅活，過濾、透析后，收集透析液；

4)利用疏水作用層析對步驟3)中的透析液進行二次分離，得含轉鐵蛋白的穿透液。

2.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟4)之后還包括步驟5)：將步驟4)得到的含轉鐵蛋白的穿透液進行超濾之后進行病毒過濾、除菌過濾，分裝凍干。

3.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中溶解FIV-1沉淀的緩沖液的pH為7.0～9.0；

優選地，所述的緩沖液為pH 7.0-9.0，10～100mM的磷酸鹽緩沖液或pH 7.0～9.0，10～100mM的Tris-HCl緩沖液。

4.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中，溶解在20～45℃的溫度下進行5～10h。

5.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟2)具體為：取裝有陰離子交換層析填料的色譜柱，用平衡緩沖液平衡色譜柱后上樣，然后用洗脫液進行洗脫，收集含轉鐵蛋白的洗脫液。

6.如權利要求5所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟2)中，陰離子交換層析填料為：DEAE Sepharose High Performance、DEAE Sepharose Fast Flow、DEAE Macro-Prep、Toyopearyl DEAE-650M、Q Sepharose High Performance、Q Sepharose Fast Flow或Capto Q；

平衡緩沖液為pH 6.5～9.0，10～100mM的Tris-HCl緩沖液或pH 6.5～9.0，10～100mM的磷酸鹽緩沖液；

洗脫以A液和B液為洗脫液進行線性梯度洗脫，其中，所述A液為平衡緩沖液，所述B液為含0.08～0.15M NaCl，pH 6.5～9.0，10～100mM的Tris-HCl緩沖液或含0.08～0.15M NaCl，pH 6.5～9.0，10～100mM的磷酸鹽緩沖液。

7.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟3)具體為：向步驟2)得到的洗脫液中加入磷酸三正丁酯和吐溫-80至其最終濃度分別為0.2～0.4％和0.5～1.5％，進行S/D滅活，于20～30℃滅活3-10h后，進行過濾和透析，收集透析液。

8.如權利要求1所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟4)具體為：取裝有疏水作用層析填料的色譜柱，用平衡緩沖液平衡色譜柱后上樣，用洗脫液進行洗脫，得到含轉鐵蛋白的穿透液。

9.如權利要求8所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述的步驟4)中疏水作用層析填料為Butyl Sepharose High Performance、Phenyl Sepharose High Performance、Octyl Sepharose High Performance、Phenyl Sepharose Fast Flow、Octyl Sepharose Fast Flow或Butyl Sepharose Fast Flow；

平衡緩沖液為含0.1～1M NaCl，pH 7.0～9.0，10～100mM的Tris-HCl或含0.1～1M NaCl，pH 7.0～9.0，10～100mM的磷酸鹽緩沖液；

洗脫以A液和B液為洗脫液進行線性梯度洗脫，其中，所述A液為平衡緩沖液，所述B液為pH 7.0～9.0，10～100mM的Tris-HCl緩沖液或pH 7.0～9.0，10～100mM的磷酸鹽緩沖液。

10.如權利要求2所述的人血漿轉鐵蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟5)具體為：將步驟4)得到的含轉鐵蛋白的穿透液進行超濾濃縮至其濃度為10～50mg/ml，之后進行15nm病毒過濾、除菌過濾、分裝凍干，凍干過程：先在空氣氛圍中-25℃保持2-4h，再在-40℃保持2-4h，然后在真空條件下，-10℃保持30-40h，升溫至35℃再保持20～30h，即完成凍干。